Wilms8

Wilms8-cellelinjen stammer fra en primær Wilms-tumor hos en pædiatrisk patient med en germline WT1-mutation. Denne cellelinje er karakteriseret ved en homozygot nonsensmutation i WT1-genet (c.1168 C>T, p.R390X), hvilket fører til et fuldstændigt tab af WT1-funktion. WT1 er afgørende for normal nyreudvikling, og dets inaktivering er et almindeligt træk i visse aggressive undertyper af Wilms-tumor, især dem, der udviser mesenkymal differentiering. Wilms8 er derfor en værdifuld model til at studere effekten af WT1-tab på tumorigenese, især i forbindelse med Wilms-tumorer, der opstår med en udpræget stromal komponent.

Ud over WT1-mutationen har Wilms8-celler en mutation i CTNNB1-genet (p.S45A), som koder for β-Catenin, en vigtig regulator af Wnt-signalvejen. Mutationen på serin 45 forstyrrer den normale fosforyleringsproces, der fører til nedbrydning af β-Catenin, hvilket forårsager stabilisering og ophobning i kernen. Dette resulterer i en konstitutiv aktivering af Wnt-signalering, som driver celleproliferation og bidrager til de onkogene egenskaber ved Wilms8-cellelinjen. Samspillet mellem WT1-tab og afvigende Wnt-signalering i Wilms8 gør den til en afgørende model for at forstå de molekylære mekanismer, der ligger til grund for disse veje i Wilms-tumorbiologi.

Wilms8-celler udviser en mesenkymfænotype, der er karakteriseret ved ekspression af vimentin og fravær af epitelmarkører som cytokeratin. Dette stemmer overens med den stromale differentiering, der blev observeret i den oprindelige tumor. Cellerne udviser en begrænset evne til at gennemgå yderligere mesenkymal differentiering, såsom at danne muskellignende celler under specifikke forhold. Proteomiske analyser af Wilms8 har afsløret aktivering af flere receptortyrosinkinaser (RTK'er), herunder PDGFRβ og AXL, som er involveret i nøgleprocesser som celleoverlevelse, migration og spredning. Aktiveringen af downstream-signalveje, især MAPK- og PI3K/AKT-vejene, bidrager yderligere til Wilms8-cellernes aggressive egenskaber.

Samlet set fungerer Wilms8-cellelinjen som et vigtigt værktøj til at undersøge det molekylære grundlag for Wilms-tumor, der er drevet af WT1-tab og afvigende Wnt-signalering. Dens genetiske og fænotypiske egenskaber gør den til en robust platform til at studere samspillet mellem disse kritiske veje og til at identificere potentielle terapeutiske mål i Wilms-tumorer med en stromal komponent.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring