Wilms6

Wilms6-cellelinjen blev etableret fra en primær Wilms-tumor hos en pædiatrisk patient med en germline WT1-mutation. Denne cellelinje er defineret af en homozygot nonsensmutation i WT1-genet (c.1168 C>T, p.R390X), som resulterer i et afkortet og ikke-funktionelt WT1-protein. WT1 er en kritisk regulator for nyreudvikling, og tabet af det er stærkt forbundet med Wilms-tumor, især i tilfælde, der viser mesenkymal differentiering. Wilms6-cellelinjen er en vigtig model til at studere de tumorigeniske effekter af komplet WT1-tab, især i forbindelse med tumorer, der udviser både epiteliale og mesenkymale egenskaber.

Wilms6-celler bærer også en mutation i CTNNB1-genet, der specifikt påvirker serin 45 (p.S45F), et vigtigt sted for fosforylering, der regulerer β-Catenin-nedbrydningen. Denne mutation fører til stabilisering og nuklear ophobning af β-Catenin, hvilket resulterer i en konstitutiv aktivering af Wnt-signalvejen. Den afvigende aktivering af Wnt-signalering er en kendt drivkraft for celleproliferation og tumorigenese i Wilms-tumorer, hvilket gør Wilms6 til et værdifuldt værktøj til at undersøge den rolle, som dysregulering af Wnt-signalvejen spiller i tumorer med WT1-mutationer.

Fænotypisk udviser Wilms6-celler en mesenkym-morfologi med stærk ekspression af vimentin og fravær af epitelmarkører som cytokeratin, hvilket afspejler den oprindelige tumors stromale natur. Disse celler har vist sig at have et begrænset, men bemærkelsesværdigt differentieringspotentiale, herunder evnen til at differentiere til muskellignende celler under specifikke forhold, hvilket afspejler den mesenkymale differentiering, der er observeret i nogle Wilms-tumorer. Proteomiske studier af Wilms6 har identificeret aktivering af flere receptortyrosinkinaser (RTK'er), herunder PDGFRβ og AXL, som er involveret i at fremme celleoverlevelse, spredning og migration. Den efterfølgende aktivering af signalveje som MAPK og PI3K/AKT understreger yderligere den aggressive karakter af denne cellelinje.

Samlet set fungerer Wilms6-cellelinjen som en afgørende model til at udforske de molekylære mekanismer, der ligger til grund for udviklingen af Wilms-tumorer, især i tilfælde af komplet WT1-tab kombineret med aktivering af Wnt-signalering. Dens genetiske og fænotypiske egenskaber gør den til en fremragende platform til at studere samspillet mellem WT1-mangel og afvigende signalveje, hvilket giver indsigt i potentielle terapeutiske mål for denne aggressive tumortype.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring