Wilms6

La lignée cellulaire Wilms6 a été établie à partir d’une tumeur de Wilms primaire chez un enfant présentant une mutation germinale du gène WT1. Cette lignée cellulaire se caractérise par une mutation non-sens homozygote dans le gène WT1 (c.1168 C>T, p.R390X), qui entraîne la production d’une protéine WT1 tronquée et non fonctionnelle. Le gène WT1 est un régulateur essentiel du développement rénal, et sa perte est étroitement associée à la tumeur de Wilms, en particulier dans les cas présentant une différenciation mésenchymateuse. La lignée cellulaire Wilms6 constitue un modèle important pour l’étude des effets tumorigènes d’une perte complète du gène WT1, notamment dans le contexte de tumeurs présentant à la fois des caractéristiques épithéliales et mésenchymateuses.

Les cellules Wilms6 portent également une mutation du gène CTNNB1, touchant spécifiquement la sérine 45 (p.S45F), un site clé de phosphorylation qui régule la dégradation de la β-caténine. Cette mutation entraîne la stabilisation et l’accumulation nucléaire de la β-caténine, ce qui se traduit par l’activation constitutive de la voie de signalisation Wnt. L’activation aberrante de la voie de signalisation Wnt est un facteur connu de la prolifération cellulaire et de la tumorigenèse dans les tumeurs de Wilms, ce qui fait de Wilms6 un outil précieux pour étudier le rôle de la dérégulation de la voie Wnt dans les tumeurs présentant des mutations du gène WT1.

Sur le plan phénotypique, les cellules Wilms6 présentent une morphologie mésenchymateuse, avec une forte expression de la vimentine et l’absence de marqueurs épithéliaux tels que la cytokératine, ce qui reflète la nature stromale de la tumeur d’origine. Il a été démontré que ces cellules possèdent un potentiel de différenciation limité mais notable, y compris la capacité de se différencier en cellules de type musculaire dans des conditions spécifiques, ce qui reflète la différenciation mésenchymateuse observée dans certaines tumeurs de Wilms. Des études protéomiques sur la lignée Wilms6 ont mis en évidence l’activation de plusieurs récepteurs tyrosine-kinases (RTK), notamment le PDGFRβ et l’AXL, qui contribuent à favoriser la survie, la prolifération et la migration cellulaires. L’activation en aval de voies de signalisation telles que MAPK et PI3K/AKT souligne encore davantage la nature agressive de cette lignée cellulaire.

Dans l’ensemble, la lignée cellulaire Wilms6 constitue un modèle essentiel pour l’étude des mécanismes moléculaires sous-jacents au développement de la tumeur de Wilms, en particulier dans les cas de perte complète de WT1 associée à l’activation de la voie de signalisation Wnt. Ses caractéristiques génétiques et phénotypiques en font une excellente plateforme pour étudier l’interaction entre la déficience en WT1 et les voies de signalisation aberrantes, fournissant ainsi des indications sur des cibles thérapeutiques potentielles pour ce type de tumeur agressif.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.