Wilms8

La lignée cellulaire Wilms8 a été dérivée d’une tumeur de Wilms primaire chez un patient pédiatrique présentant une mutation germinale du gène WT1. Cette lignée cellulaire se caractérise par une mutation non-sens homozygote dans le gène WT1 (c.1168 C>T, p.R390X), entraînant une perte complète de la fonction de WT1. Le gène WT1 est essentiel au développement normal du rein, et son inactivation est une caractéristique courante de certains sous-types agressifs de tumeurs de Wilms, en particulier ceux qui présentent une différenciation mésenchymateuse. Wilms8 constitue donc un modèle précieux pour étudier les effets de la perte de WT1 sur la tumorigenèse, en particulier dans le contexte des tumeurs de Wilms présentant une composante stromale marquée.

En plus de la mutation du gène WT1, les cellules Wilms8 présentent une mutation du gène CTNNB1 (p.S45A), qui code pour la β-caténine, un régulateur clé de la voie de signalisation Wnt. La mutation au niveau de la sérine 45 perturbe le processus normal de phosphorylation qui conduit à la dégradation de la β-caténine, entraînant sa stabilisation et son accumulation dans le noyau. Il en résulte une activation constitutive de la voie de signalisation Wnt, qui stimule la prolifération cellulaire et contribue aux propriétés oncogéniques de la lignée cellulaire Wilms8. L’interaction entre la perte de WT1 et la signalisation Wnt aberrante dans Wilms8 en fait un modèle crucial pour comprendre les mécanismes moléculaires sous-jacents à ces voies dans la biologie de la tumeur de Wilms.

Les cellules Wilms8 présentent un phénotype mésenchymateux, caractérisé par l’expression de la vimentine et l’absence de marqueurs épithéliaux tels que la cytokératine. Cela correspond à la différenciation stromale observée dans la tumeur d’origine. Les cellules démontrent une capacité limitée à subir une différenciation mésenchymateuse plus poussée, comme la formation de cellules de type musculaire dans des conditions spécifiques. Les analyses protéomiques de Wilms8 ont révélé l’activation de plusieurs récepteurs de tyrosine kinase (RTK), notamment le PDGFRβ et l’AXL, qui interviennent dans des processus clés tels que la survie, la migration et la prolifération cellulaires. L’activation des voies de signalisation en aval, en particulier les voies MAPK et PI3K/AKT, contribue davantage aux caractéristiques agressives des cellules Wilms8.

Dans l’ensemble, la lignée cellulaire Wilms8 constitue un outil essentiel pour étudier les fondements moléculaires de la tumeur de Wilms, qui résulte d’une perte de WT1 et d’une signalisation Wnt aberrante. Ses caractéristiques génétiques et phénotypiques en font une plateforme robuste pour étudier l’interaction entre ces voies critiques et pour identifier des cibles thérapeutiques potentielles dans les tumeurs de Wilms présentant une composante stromale.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.