Wilms8

La línea celular Wilms8 se derivó de un tumor de Wilms primario en un paciente pediátrico con una mutación germinal WT1. Esta línea celular se caracteriza por una mutación homocigota sin sentido en el gen WT1 (c.1168 C>T, p.R390X), que conduce a una pérdida completa de la función de WT1. WT1 es crucial para el desarrollo normal del riñón, y su inactivación es una característica común en ciertos subtipos agresivos de tumor de Wilms, en particular los que presentan diferenciación mesenquimal. Por lo tanto, Wilms8 constituye un modelo valioso para estudiar los efectos de la pérdida de WT1 en la tumorigénesis, especialmente en el contexto de los tumores de Wilms que surgen con un componente estromal pronunciado.

Además de la mutación WT1, las células Wilms8 albergan una mutación en el gen CTNNB1 (p.S45A), que codifica la β-Catenina, un regulador clave de la vía de señalización Wnt. La mutación en la serina 45 interrumpe el proceso normal de fosforilación que conduce a la degradación de la β-Catenina, provocando su estabilización y acumulación en el núcleo. Esto da lugar a la activación constitutiva de la señalización Wnt, que impulsa la proliferación celular y contribuye a las propiedades oncogénicas de la línea celular Wilms8. La interacción entre la pérdida de WT1 y la señalización Wnt aberrante en Wilms8 la convierte en un modelo crucial para comprender los mecanismos moleculares subyacentes a estas vías en la biología del tumor de Wilms.

Las células Wilms8 muestran un fenotipo mesenquimal, caracterizado por la expresión de vimentina y la ausencia de marcadores epiteliales como la citoqueratina. Esto coincide con la diferenciación estromal observada en el tumor original. Las células demuestran una capacidad limitada para experimentar una mayor diferenciación mesenquimal, como la formación de células de tipo muscular en condiciones específicas. Los análisis proteómicos de Wilms8 han revelado la activación de múltiples receptores tirosina quinasas (RTK), incluidos PDGFRβ y AXL, que intervienen en procesos clave como la supervivencia, la migración y la proliferación celular. La activación de vías de señalización descendentes, en particular las vías MAPK y PI3K/AKT, contribuye aún más a las características agresivas de las células Wilms8.

En general, la línea celular Wilms8 constituye una herramienta esencial para investigar las bases moleculares del tumor de Wilms provocado por la pérdida de WT1 y la señalización aberrante de Wnt. Sus características genéticas y fenotípicas la convierten en una plataforma sólida para estudiar la interacción entre estas vías críticas y para identificar posibles dianas terapéuticas en tumores de Wilms con un componente estromal.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía