Wilms8

Wilms8細胞株は、生殖細胞系列のWT1突然変異を持つ小児患者の原発性Wilms腫瘍に由来する。この細胞株は、WT1遺伝子のホモ接合性ナンセンス変異（c.1168 C>T、p.R390X）によって特徴付けられ、WT1の機能が完全に失われている。WT1は正常な腎臓の発生に不可欠であり、その不活性化はウィルムス腫瘍のある種の攻撃的なサブタイプ、特に間葉系分化を示す腫瘍に共通する特徴である。したがって、Wilms8は、特に間葉系成分を顕著に伴って発生するWilms腫瘍の文脈において、腫瘍形成に対するWT1欠損の影響を研究するための貴重なモデルとなる。

WT1変異に加え、ウィルムス8細胞は、Wntシグナル伝達経路の重要な制御因子であるβ-カテニンをコードするCTNNB1遺伝子の変異（p.S45A）を保有している。セリン45の変異は、β-カテニンの分解につながる正常なリン酸化プロセスを破壊し、β-カテニンの安定化と核への蓄積を引き起こす。この結果、Wntシグナル伝達が恒常的に活性化され、細胞増殖が促進され、Wilms8細胞株のがん化特性に寄与する。ウィルムス8におけるWT1欠損と異常なWntシグナル伝達の相互作用は、ウィルムス腫瘍生物学におけるこれらの経路の根底にある分子機構を理解するための重要なモデルとなっている。

Wilms8細胞は間葉系の表現型を示し、ビメンチンの発現とサイトケラチンのような上皮性マーカーの欠如が特徴である。これは元の腫瘍で観察された間質分化と一致している。この細胞は、特定の条件下で筋肉様細胞を形成するなど、さらなる間葉系分化を受ける限定的な能力を示す。Wilms8のプロテオーム解析から、細胞の生存、移動、増殖などの重要なプロセスに関与するPDGFRβやAXLを含む複数の受容体チロシンキナーゼ（RTK）の活性化が明らかになった。下流のシグナル伝達経路、特にMAPK経路とPI3K/ACT経路の活性化は、Wilms8細胞の攻撃的な特徴をさらに助長している。

全体として、Wilms8細胞株は、WT1欠損と異常なWntシグナル伝達によって引き起こされるWilms腫瘍の分子基盤を研究するための不可欠なツールである。その遺伝的および表現型の特徴から、これらの重要な経路間の相互作用を研究し、間質成分を有するウィルムス腫瘍の潜在的治療標的を同定するための強固なプラットフォームとなっている。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。