Wilms3

Wilms3細胞株は、WT1体細胞突然変異を特徴とする小児患者の原発性Wilms腫瘍から樹立された。他の多くのウィルムス腫瘍細胞株とは異なり、ウィルムス3はWT1遺伝子にヘテロ接合性のフレームシフト変異（c.1293-1294insA, p.V432SfsX87）を有し、切断型WT1タンパク質の産生をもたらす。このWT1の部分的な機能喪失は、間質性または間葉性の表現型を示す腫瘍の発生と関連している。しかしながら、Wilms3のWT1変異はホモ接合体ではないため、WT1が完全に欠損した細胞株と比較して、腫瘍生物学に異なる影響を及ぼす可能性のあるWT1の機能をある程度保持しており、その研究が複雑になっている。

Wilms3はCTNNB1遺伝子にも変異を有しており、特にWntシグナル伝達経路で重要な役割を果たすスレオニン41（p.T41A）に影響を及ぼしている。この変異はβ-カテニンを安定化させ、その分解を妨げ、Wnt経路の恒常的な活性化につながる。Wntシグナル伝達の持続的な活性化は、Wilms3における細胞増殖を促進し、腫瘍形成に寄与するため、部分的に機能するWT1バックグラウンドの文脈におけるCTNNB1変異の影響を研究するための重要なモデルとなっている。

表現型的には、Wilms3細胞は間葉様形態を示し、ビメンチンを発現し、サイトケラチンを欠く。これらの細胞は限定された分化能を示し、特定の条件下では間葉系分化を受けることができる。Wilms3のプロテオーム解析から、細胞の生存と増殖をサポートするPDGFRβやAXLを含むいくつかの受容体チロシンキナーゼ（RTK）の活性化が明らかになった。さらに、MAPKやPI3K/ACTなどの下流のシグナル伝達経路が活性化され、Wilms3細胞の悪性特性を強化している。

ウィルムス3のユニークな側面の一つは、部分的なWT1機能性であり、これは、変異が完全でない場合にWT1変異がウィルムス腫瘍生物学にどのように寄与するかについて、明確な視点を提供する。Wilms3におけるWT1とWntシグナルの相互作用は、腫瘍発生においてこれらの経路が果たす微妙な役割を研究する貴重な機会を提供する。全体として、Wilms3は、WT1の部分欠損と構成的Wnt経路活性化が存在するウィルムス腫瘍の根底にある分子メカニズムを研究するための重要なモデルである。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。