Wilms8

Garis sel Wilms8 berasal dari tumor Wilms primer pada pasien anak dengan mutasi gen WT1. Garis sel ini ditandai dengan mutasi omong kosong homozigot pada gen WT1 (c.1168 C>T, p.R390X), yang menyebabkan hilangnya fungsi WT1 secara total. WT1 sangat penting untuk perkembangan ginjal normal, dan inaktivasi gen ini merupakan ciri umum pada subtipe tumor Wilms yang agresif, terutama yang menunjukkan diferensiasi mesenkim. Oleh karena itu, Wilms8 memberikan model yang berharga untuk mempelajari efek hilangnya WT1 pada tumorigenesis, terutama dalam konteks tumor Wilms yang muncul dengan komponen stroma yang jelas.

Selain mutasi WT1, sel Wilms8 memiliki mutasi pada gen CTNNB1 (p.S45A), yang mengkodekan β-Catenin, pengatur utama jalur pensinyalan Wnt. Mutasi pada serin 45 mengganggu proses fosforilasi normal yang mengarah pada degradasi β-Catenin, menyebabkan stabilisasi dan akumulasi di dalam nukleus. Hal ini menghasilkan aktivasi konstitutif pensinyalan Wnt, yang mendorong proliferasi sel dan berkontribusi pada sifat onkogenik garis sel Wilms8. Interaksi antara hilangnya WT1 dan pensinyalan Wnt yang menyimpang di Wilms8 menjadikannya model penting untuk memahami mekanisme molekuler yang mendasari jalur-jalur ini dalam biologi tumor Wilms.

Sel Wilms8 menunjukkan fenotipe mesenkim, yang ditandai dengan ekspresi vimentin dan tidak adanya penanda epitel seperti sitokeratin. Hal ini selaras dengan diferensiasi stroma yang diamati pada tumor asli. Sel-sel menunjukkan kemampuan terbatas untuk menjalani diferensiasi mesenkim lebih lanjut, seperti membentuk sel seperti otot dalam kondisi tertentu. Analisis proteomik Wilms8 telah mengungkapkan aktivasi beberapa reseptor tirosin kinase (RTK), termasuk PDGFRβ dan AXL, yang terlibat dalam proses utama seperti kelangsungan hidup sel, migrasi, dan proliferasi. Aktivasi jalur pensinyalan hilir, khususnya jalur MAPK dan PI3K/AKT, lebih lanjut berkontribusi pada karakteristik agresif sel Wilms8.

Secara keseluruhan, garis sel Wilms8 berfungsi sebagai alat penting untuk menyelidiki dasar molekuler tumor Wilms yang didorong oleh hilangnya WT1 dan pensinyalan Wnt yang menyimpang. Fitur genetik dan fenotipiknya menjadikannya platform yang kuat untuk mempelajari interaksi antara jalur kritis ini dan untuk mengidentifikasi target terapeutik potensial pada tumor Wilms dengan komponen stroma.

37°C, 5%_CO2, atmosfer yang dilembabkan.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

Di Cytion, kami mendukung kualitas dan kelangsungan hidup produk kami. Kami menjamin bahwa sel kami akan dapat bertahan hidup pada awal kultur selama 60 hari setelah pengiriman dari fasilitas kami. Kami menjamin bahwa semua bahan sesuai dengan spesifikasi yang dijelaskan dalam Sertifikat Analisis dan / atau Lembar Produk

Untuk detail lengkap, silakan merujuk ke <a href=""/Siapa-kami-Garansi/Garansi/"" hreflang=""x-default"">Pernyataan Jaminan kami