Wilms8

Η κυτταρική σειρά Wilms8 προήλθε από πρωτοπαθή όγκο Wilms σε παιδιατρικό ασθενή με γεννητική μετάλλαξη WT1. Αυτή η κυτταρική σειρά χαρακτηρίζεται από μια ομοζυγωτική μετάλλαξη nonsense στο γονίδιο WT1 (c.1168 C>T, p.R390X), που οδηγεί σε πλήρη απώλεια της λειτουργίας του WT1. Το WT1 είναι ζωτικής σημασίας για τη φυσιολογική ανάπτυξη των νεφρών και η απενεργοποίησή του αποτελεί κοινό χαρακτηριστικό σε ορισμένους επιθετικούς υποτύπους όγκου Wilms, ιδίως σε εκείνους που παρουσιάζουν μεσεγχυματική διαφοροποίηση. Ο Wilms8, επομένως, παρέχει ένα πολύτιμο μοντέλο για τη μελέτη των επιπτώσεων της απώλειας του WT1 στην καρκινογένεση, ιδίως στο πλαίσιο των όγκων Wilms που εμφανίζονται με έντονο στρωματικό στοιχείο.

Εκτός από τη μετάλλαξη του WT1, τα κύτταρα Wilms8 φέρουν μετάλλαξη στο γονίδιο CTNNB1 (p.S45A), το οποίο κωδικοποιεί τη β-κατενίνη, έναν βασικό ρυθμιστή του σηματοδοτικού μονοπατιού Wnt. Η μετάλλαξη στη σερίνη 45 διαταράσσει τη φυσιολογική διαδικασία φωσφορυλίωσης που οδηγεί στην αποικοδόμηση της β-Catenin, προκαλώντας τη σταθεροποίηση και τη συσσώρευσή της στον πυρήνα. Αυτό έχει ως αποτέλεσμα τη συστατική ενεργοποίηση της σηματοδότησης Wnt, η οποία οδηγεί στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και συμβάλλει στις ογκογόνες ιδιότητες της κυτταρικής σειράς Wilms8. Η αλληλεπίδραση μεταξύ της απώλειας του WT1 και της ανώμαλης σηματοδότησης Wnt στο Wilms8 το καθιστά ένα κρίσιμο μοντέλο για την κατανόηση των μοριακών μηχανισμών που διέπουν αυτά τα μονοπάτια στη βιολογία των όγκων Wilms.

Τα κύτταρα Wilms8 εμφανίζουν μεσεγχυματικό φαινότυπο, που χαρακτηρίζεται από την έκφραση της βιμεντίνης και την απουσία επιθηλιακών δεικτών όπως η κυτταροκερατίνη. Αυτό ευθυγραμμίζεται με τη στρωματική διαφοροποίηση που παρατηρείται στον αρχικό όγκο. Τα κύτταρα επιδεικνύουν περιορισμένη ικανότητα να υφίστανται περαιτέρω μεσεγχυματική διαφοροποίηση, όπως ο σχηματισμός μυϊκών κυττάρων υπό συγκεκριμένες συνθήκες. Οι πρωτεομικές αναλύσεις του Wilms8 έχουν αποκαλύψει την ενεργοποίηση πολλαπλών κινασών τυροσίνης υποδοχέα (RTKs), συμπεριλαμβανομένων των PDGFRβ και AXL, οι οποίες εμπλέκονται σε βασικές διαδικασίες όπως η κυτταρική επιβίωση, η μετανάστευση και ο πολλαπλασιασμός. Η ενεργοποίηση των μεταγενέστερων σηματοδοτικών μονοπατιών, ιδίως των μονοπατιών MAPK και PI3K/AKT, συμβάλλει περαιτέρω στα επιθετικά χαρακτηριστικά των κυττάρων Wilms8.

Συνολικά, η κυτταρική σειρά Wilms8 χρησιμεύει ως βασικό εργαλείο για τη διερεύνηση της μοριακής βάσης του όγκου Wilms που οφείλεται στην απώλεια του WT1 και στην ανώμαλη σηματοδότηση Wnt. Τα γενετικά και φαινοτυπικά χαρακτηριστικά της την καθιστούν μια ισχυρή πλατφόρμα για τη μελέτη της αλληλεπίδρασης μεταξύ αυτών των κρίσιμων μονοπατιών και για τον εντοπισμό πιθανών θεραπευτικών στόχων σε όγκους Wilms με στρωματική συνιστώσα.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης