Wilms1

Η κυτταρική σειρά Wilms1 προήλθε από πρωτογενές δείγμα όγκου Wilms που ελήφθη από ασθενή με μεγάλους αμφοτερόπλευρους νεφρικούς όγκους, ενδεικτικούς του όγκου Wilms, ενός παιδιατρικού νεφροβλαστώματος. Αυτή η κυτταρική σειρά φέρει μια ομοζυγωτική μετάλλαξη nonsense στο γονίδιο WT1 (c.149 C>A, p.S50X), η οποία έχει ως αποτέλεσμα μια κουτσουρεμένη και μη λειτουργική πρωτεΐνη WT1. Το γονίδιο WT1, κρίσιμο για την ανάπτυξη και τη λειτουργία των νεφρών, μεταλλάσσεται συχνά στον όγκο Wilms, ιδίως σε εκείνους με στρωματικό υπότυπο που παρουσιάζει έκτοπη μεσεγχυματική διαφοροποίηση. Συνεπώς, τα κύτταρα Wilms1 αποτελούν ένα μοναδικό in vitro μοντέλο για τη μελέτη των συνεπειών της απώλειας της λειτουργίας του WT1 στη βιολογία των όγκων.

Η κυτταρική σειρά Wilms1 διατηρεί σταθερό καρυότυπο χωρίς σημαντικές χρωμοσωμικές ανωμαλίες, επιτρέποντας αξιόπιστη μακροχρόνια καλλιέργεια. Τα κύτταρα αυτά εμφανίζουν μεσεγχυματικό φαινότυπο, που χαρακτηρίζεται από την έκφραση της βιμεντίνης και την απουσία επιθηλιακών δεικτών όπως η κυτταροκερατίνη, γεγονός που συνάδει με τη στρωματική τους προέλευση. Επιπλέον, η κυτταρική σειρά επιδεικνύει περιορισμένη αλλά αξιοσημείωτη ικανότητα μεσεγχυματικής διαφοροποίησης, συμπεριλαμβανομένης της ικανότητας διαφοροποίησης σε μυϊκά κύτταρα υπό κατάλληλες συνθήκες. Αυτό καθιστά το Wilms1 ένα ανεκτίμητο εργαλείο για τη διερεύνηση των μοριακών μηχανισμών της μεσεγχυματικής διαφοροποίησης και της απορρύθμισής της στην παθογένεια του όγκου Wilms.

Το Wilms1 έχει επίσης χρησιμοποιηθεί για τη μελέτη της κατάστασης ενεργοποίησης βασικών σηματοδοτικών μονοπατιών που εμπλέκονται στην εξέλιξη του όγκου. Πρωτεομικές αναλύσεις έδειξαν ότι τα κύτταρα Wilms1 παρουσιάζουν φωσφορυλίωση και ενεργοποίηση διαφόρων κινασών τυροσίνης υποδοχέα, συμπεριλαμβανομένων των EGFR και PDGFRβ, καθώς και των μεταγενέστερων σηματοδοτικών μονοπατιών MAPK. Τα ευρήματα αυτά αναδεικνύουν τη σημασία της κυτταρικής σειράς Wilms1 για τη διερεύνηση στοχευμένων θεραπευτικών προσεγγίσεων για τον όγκο Wilms μέσω της διερεύνησης του ρόλου αυτών των μονοπατιών στην επιβίωση, τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των καρκινικών κυττάρων.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης