Wilms1

La linea cellulare Wilms1 è stata derivata da un campione primario di tumore di Wilms ottenuto da un paziente che presentava grandi tumori renali bilaterali, indicativi del tumore di Wilms, un nefroblastoma pediatrico. Questa linea cellulare è portatrice di una mutazione nonsense omozigote nel gene WT1 (c.149 C>A, p.S50X), che determina una proteina WT1 tronca e non funzionale. Il gene WT1, fondamentale per lo sviluppo e la funzione del rene, è frequentemente mutato nel tumore di Wilms, in particolare in quelli con un sottotipo stromale che presenta una differenziazione mesenchimale ectopica. Le cellule Wilms1 rappresentano quindi un modello unico in vitro per studiare le conseguenze della perdita di funzione di WT1 nella biologia tumorale.

La linea cellulare Wilms1 mantiene un cariotipo stabile senza anomalie cromosomiche significative, consentendo una coltura affidabile a lungo termine. Queste cellule presentano un fenotipo mesenchimale, caratterizzato dall'espressione di vimentina e dall'assenza di marcatori epiteliali come la citocheratina, coerentemente con la loro origine stromale. Inoltre, la linea cellulare dimostra una limitata ma notevole capacità di differenziazione mesenchimale, compresa la capacità di differenziarsi in cellule simili ai muscoli in condizioni appropriate. Ciò rende Wilms1 uno strumento prezioso per studiare i meccanismi molecolari della differenziazione mesenchimale e la sua deregolazione nella patogenesi del tumore di Wilms.

Wilms1 è stato utilizzato anche per studiare lo stato di attivazione di vie di segnalazione chiave coinvolte nella progressione tumorale. Le analisi proteomiche hanno dimostrato che le cellule di Wilms1 presentano la fosforilazione e l'attivazione di diverse tirosin-chinasi recettoriali, tra cui EGFR e PDGFRβ, nonché delle vie di segnalazione MAPK a valle. Questi risultati evidenziano l'importanza della linea cellulare Wilms1 per esplorare approcci terapeutici mirati per il tumore di Wilms, analizzando il ruolo di queste vie nella sopravvivenza, nella proliferazione e nella differenziazione delle cellule tumorali.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia