Wilms2

La linea cellulare Wilms2 è stata derivata da un tumore di Wilms primario di un paziente pediatrico con una mutazione WT1 germinale. Questa linea cellulare è caratterizzata da una mutazione nonsense omozigote nel gene WT1 (c.1084 C>T, p.R362X), che determina la produzione di una proteina WT1 tronca e non funzionale. La perdita della funzione di WT1, un gene essenziale per lo sviluppo del rene, è un segno distintivo di alcuni sottotipi di tumore di Wilms, in particolare quelli associati alla differenziazione mesenchimale o stromale. La linea cellulare Wilms2 è un modello significativo per studiare i processi tumorali guidati dalla perdita di WT1, soprattutto nel contesto dei tumori di Wilms che conservano altre caratteristiche genetiche critiche.

Le cellule Wilms2 portano anche mutazioni nel gene CTNNB1, che codifica la β-catenina, un componente chiave della via di segnalazione Wnt. Queste mutazioni, che interessano specificamente la serina 45, portano alla stabilizzazione e all'accumulo di β-Catenina, con conseguente attivazione costitutiva della via Wnt. Questa attivazione è un noto motore della proliferazione cellulare e della tumorigenesi nel tumore di Wilms, rendendo Wilms2 un modello prezioso per comprendere come la segnalazione Wnt aberrante contribuisca allo sviluppo e alla progressione dei tumori con mutazioni WT1.

In termini di fenotipo, le cellule di Wilms2 presentano una morfologia di tipo mesenchimale, esprimendo vimentina e mancando di marcatori epiteliali come la citocheratina. Ciò corrisponde alle caratteristiche stromali del tumore e sottolinea il ruolo di WT1 nella regolazione della transizione mesenchimale-epiteliale durante lo sviluppo del rene. Le analisi proteomiche di Wilms2 hanno identificato l'attivazione di diverse tirosin-chinasi recettoriali (RTK), tra cui PDGFRβ e AXL, note per sostenere la sopravvivenza e la proliferazione delle cellule tumorali. Inoltre, vengono attivate anche le vie a valle, come MAPK e PI3K/AKT, che contribuiscono ulteriormente alle proprietà maligne delle cellule Wilms2.

Nel complesso, la linea cellulare Wilms2 serve come strumento essenziale per esplorare i meccanismi molecolari del tumore di Wilms guidato dalla perdita di WT1 e dalla segnalazione Wnt aberrante. Le sue caratteristiche genetiche e fenotipiche forniscono una solida piattaforma per studiare potenziali bersagli terapeutici e per comprendere il ruolo di vie di segnalazione chiave nella patologia dei tumori di Wilms con una componente mesenchimale.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia