Wilms2

Wilms2 hücre hattı, germline WT1 mutasyonu olan bir pediatrik hastanın primer Wilms tümöründen türetilmiştir. Bu hücre hattı, WT1 geninde (c.1084 C>T, p.R362X) kesilmiş, işlevsel olmayan bir WT1 proteininin üretilmesiyle sonuçlanan homozigot bir saçma mutasyon ile karakterize edilir. Böbrek gelişimi için gerekli bir gen olan fonksiyonel WT1'in kaybı, Wilms tümörünün belirli alt tiplerinin, özellikle de mezenkimal veya stromal farklılaşma ile ilişkili olanların ayırt edici özelliğidir. Wilms2 hücre hattı, özellikle diğer kritik genetik özellikleri koruyan Wilms tümörleri bağlamında, WT1 kaybının neden olduğu tümörijenik süreçleri incelemek için önemli bir modeldir.

Wilms2 hücreleri ayrıca Wnt sinyal yolunun önemli bir bileşeni olan β-Katenin'i kodlayan CTNNB1 geninde mutasyonlar taşır. Özellikle serin 45'i etkileyen bu mutasyonlar, β-Catenin'in stabilizasyonuna ve birikimine yol açarak Wnt yolunun yapısal aktivasyonuna neden olur. Bu aktivasyon, Wilms tümöründe hücre proliferasyonu ve tümörigenezin bilinen bir itici gücüdür ve Wilms2'yi, anormal Wnt sinyalinin WT1 mutasyonlu tümörlerin gelişimine ve ilerlemesine nasıl katkıda bulunduğunu anlamak için değerli bir model haline getirir.

Fenotip açısından, Wilms2 hücreleri mezenkimal benzeri bir morfoloji sergiler, vimentin eksprese eder ve sitokeratin gibi epitelyal belirteçlerden yoksundur. Bu, tümörün stromal özellikleriyle uyumludur ve WT1'in böbrek gelişimi sırasında mezenkimal-epitelyal geçişleri düzenlemedeki rolünün altını çizmektedir. Wilms2'nin proteomik analizleri, tümör hücresi sağkalımını ve çoğalmasını desteklediği bilinen PDGFRβ ve AXL dahil olmak üzere çeşitli reseptör tirozin kinazların (RTK'lar) aktivasyonunu tanımlamıştır. Ayrıca, MAPK ve PI3K/AKT gibi aşağı akış yolları da aktive olarak Wilms2 hücrelerinin kötü huylu özelliklerine daha fazla katkıda bulunur.

Genel olarak, Wilms2 hücre hattı, WT1 kaybı ve anormal Wnt sinyali tarafından yönlendirilen Wilms tümörünün moleküler mekanizmalarını araştırmak için önemli bir araç görevi görmektedir. Genetik ve fenotipik özellikleri, potansiyel terapötik hedeflerin araştırılması ve mezenkimal bileşenli Wilms tümörlerinin patolojisinde kilit sinyal yollarının rolünün anlaşılması için sağlam bir platform sağlar.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın