Wilms2

Wilms2-cellinjen härrör från en primär Wilms-tumör hos en pediatrisk patient med en WT1-mutation i arvsmassan. Denna cellinje kännetecknas av en homozygot nonsensmutation i WT1-genen (c.1084 C>T, p.R362X), vilket resulterar i produktion av ett trunkerat, icke-funktionellt WT1-protein. Förlusten av funktionellt WT1, en gen som är viktig för njurarnas utveckling, är ett kännetecken för vissa subtyper av Wilms tumör, särskilt de som är förknippade med mesenkymal eller stromal differentiering. Wilms2-cellinjen är en viktig modell för att studera de tumörframkallande processer som drivs av WT1-förlusten, särskilt i samband med Wilms-tumörer som har kvar andra kritiska genetiska egenskaper.

Wilms2-cellerna bär också på mutationer i CTNNB1-genen, som kodar för β-Catenin, en nyckelkomponent i Wnt-signalvägen. Dessa mutationer, som specifikt påverkar serin 45, leder till stabilisering och ackumulering av β-Catenin, vilket resulterar i en konstitutiv aktivering av Wnt-signalvägen. Denna aktivering är en känd drivkraft för cellproliferation och tumörutveckling i Wilms tumör, vilket gör Wilms2 till en värdefull modell för att förstå hur avvikande Wnt-signalering bidrar till utveckling och progression av tumörer med WT1-mutationer.

När det gäller fenotyp uppvisar Wilms2-celler en mesenkymalliknande morfologi, uttrycker vimentin och saknar epitelmarkörer som cytokeratin. Detta överensstämmer med tumörens stromala egenskaper och understryker WT1:s roll i regleringen av mesenkymal-epiteliala övergångar under njurutvecklingen. Proteomiska analyser av Wilms2 har identifierat aktivering av flera receptortyrosinkinaser (RTK), inklusive PDGFRβ och AXL, som är kända för att stödja tumörcellernas överlevnad och spridning. Dessutom aktiveras även nedströmsvägar som MAPK och PI3K/AKT, vilket ytterligare bidrar till Wilms2-cellernas maligna egenskaper.

Sammantaget fungerar Wilms2-cellinjen som ett viktigt verktyg för att utforska de molekylära mekanismerna för Wilms-tumörer som drivs av WT1-förlust och avvikande Wnt-signalering. Dess genetiska och fenotypiska egenskaper utgör en robust plattform för att undersöka potentiella terapeutiska mål och för att förstå vilken roll viktiga signalvägar spelar i patologin hos Wilms-tumörer med en mesenkymal komponent.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring