Wilms2

A linha celular Wilms2 foi derivada de um tumor primário de Wilms de um doente pediátrico com uma mutação WT1 na linha germinal. Esta linha celular é caracterizada por uma mutação homozigótica sem sentido no gene WT1 (c.1084 C>T, p.R362X), que resulta na produção de uma proteína WT1 truncada e não funcional. A perda de WT1 funcional, um gene essencial para o desenvolvimento dos rins, é uma caraterística de certos subtipos de tumor de Wilms, particularmente os associados à diferenciação mesenquimal ou estromal. A linha de células Wilms2 é um modelo importante para o estudo dos processos tumorigénicos provocados pela perda do WT1, especialmente no contexto dos tumores de Wilms que mantêm outras caraterísticas genéticas críticas.

As células Wilms2 também apresentam mutações no gene CTNNB1, que codifica a β-Catenina, um componente-chave da via de sinalização Wnt. Estas mutações, que afectam especificamente a serina 45, levam à estabilização e acumulação de β-Catenina, resultando na ativação constitutiva da via Wnt. Esta ativação é um fator conhecido de proliferação celular e tumorigénese no tumor de Wilms, o que faz do Wilms2 um modelo valioso para compreender como a sinalização Wnt aberrante contribui para o desenvolvimento e progressão de tumores com mutações WT1.

Em termos de fenótipo, as células Wilms2 exibem uma morfologia semelhante à mesenquimal, expressando vimentina e sem marcadores epiteliais como a citoqueratina. Este facto está de acordo com as caraterísticas estromais do tumor e sublinha o papel do WT1 na regulação das transições mesenquimatosas-epiteliais durante o desenvolvimento do rim. As análises proteómicas do Wilms2 identificaram a ativação de vários receptores tirosina-quinases (RTKs), incluindo o PDGFRβ e o AXL, que são conhecidos por apoiar a sobrevivência e a proliferação das células tumorais. Além disso, as vias a jusante, como a MAPK e a PI3K/AKT, também são activadas, contribuindo ainda mais para as propriedades malignas das células Wilms2.

De um modo geral, a linha celular Wilms2 constitui uma ferramenta essencial para explorar os mecanismos moleculares do tumor de Wilms provocado pela perda de WT1 e pela sinalização Wnt aberrante. As suas caraterísticas genéticas e fenotípicas constituem uma plataforma robusta para a investigação de potenciais alvos terapêuticos e para a compreensão do papel das principais vias de sinalização na patologia dos tumores de Wilms com um componente mesenquimal.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia