Wilms10T

A linha celular Wilms10T foi derivada de uma amostra primária de tumor de Wilms obtida de um doente com tumor de Wilms, um nefroblastoma pediátrico. Esta linha celular é caracterizada por uma deleção homozigótica do gene WT1, levando a uma perda completa da função do WT1, um gene crítico envolvido no desenvolvimento dos rins e na manutenção da diferenciação renal normal. Ao contrário de muitas outras linhas celulares de tumor de Wilms, a Wilms10T não tem qualquer expressão da proteína WT1, o que reflecte as graves alterações genéticas presentes neste subtipo de tumor. Além disso, a linha celular Wilms10T apresenta perda de heterozigotia (LOH) na região cromossómica 11p15, que inclui genes importantes como o IGF2, contribuindo ainda mais para as suas propriedades tumorigénicas.

As células Wilms10T têm um cariótipo normal estável, sem rearranjos cromossómicos importantes para além da deleção específica da região WT1. Esta linha celular tem sido utilizada extensivamente para estudar os efeitos da perda completa de WT1 na biologia tumoral, incluindo o seu impacto na proliferação celular, diferenciação e resposta a várias vias de sinalização. As células mantêm caraterísticas mesenquimatosas, expressando marcadores como a vimentina, mas não possuem marcadores epiteliais como a citoqueratina, o que indica a sua origem estromal.

Uma investigação significativa centrou-se nas vias de sinalização activas nas células Wilms10T. Estudos proteómicos demonstraram que estas células apresentam ativação de vários receptores tirosina-quinases (RTK), como o IGF1R, o PDGFRβ e o AXL, que são conhecidos por impulsionar a tumorigénese. Além disso, as vias de sinalização a jusante, incluindo as vias MAPK e PI3K/AKT, são activadas nas células Wilms10T, contribuindo para o seu fenótipo tumoral agressivo. A caraterização abrangente das células Wilms10T torna-as um modelo valioso para a investigação dos fundamentos moleculares do tumor de Wilms com perda completa de WT1, bem como para a exploração de potenciais alvos terapêuticos neste subtipo de tumor agressivo.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia