Wilms11

A linha celular Wilms11 foi derivada de um tumor primário de Wilms (nefroblastoma) de um doente pediátrico. Ao contrário de muitas outras linhas celulares de tumor de Wilms, a Wilms11 é caracterizada pela presença de WT1 de tipo selvagem, o que significa que não alberga mutações no gene WT1, que está tipicamente associado a tumores de Wilms que exibem fenótipos mais agressivos ou estromais. No entanto, o tumor Wilms11 apresentava uma diferenciação estromal significativa, com grandes áreas de diferenciação rabdomiomatosa, indicativas de elementos mesenquimatosos no tumor. A presença de WT1 de tipo selvagem, juntamente com a diferenciação estromal do tumor, fornece um modelo único para a compreensão da biologia do tumor de Wilms nos casos em que as mutações de WT1 estão ausentes.

Estudos genéticos do Wilms11 demonstraram que esta linha celular é portadora de uma mutação específica do tumor no CTNNB1, o gene que codifica a β-Catenina, que desempenha um papel crucial na via de sinalização Wnt. Em Wilms11, esta mutação afecta a serina 45, um local de fosforilação chave envolvido na degradação da β-Catenina. A mutação CTNNB1 resulta na estabilização da β-Catenina, levando à sua acumulação e à ativação constitutiva da via de sinalização Wnt, um motor da proliferação celular e da tumorigénese. Isto faz do Wilms11 um modelo importante para estudar a interação entre a sinalização Wnt e o desenvolvimento do tumor de Wilms, particularmente nos casos em que o WT1 permanece intacto.

As análises proteómicas do Wilms11 revelaram a ativação de vários receptores tirosina-quinases (RTKs), incluindo o PDGFRβ e o AXL, que estão envolvidos na condução do crescimento e sobrevivência das células tumorais. As vias de sinalização a jusante, como as vias MAPK e PI3K/AKT, também são activadas nas células Wilms11, contribuindo para o seu comportamento tumorigénico. A capacidade das células Wilms11 de sofrerem diferenciação mesenquimal, particularmente a diferenciação rabdomiomatosa, destaca o seu potencial como modelo para o estudo dos componentes mesenquimais do tumor de Wilms. De um modo geral, as células Wilms11 constituem uma ferramenta valiosa para a investigação dos mecanismos moleculares que conduzem à tumorigénese de Wilms na ausência de mutações WT1 mas no contexto da ativação da via Wnt.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia