Wilms11

A linhagem celular Wilms11 foi derivada de um tumor de Wilms primário (nefroblastoma) em um paciente pediátrico. Ao contrário de muitas outras linhagens celulares de tumor de Wilms, a Wilms11 é caracterizada pela presença do WT1 de tipo selvagem, o que significa que não apresenta mutações no gene WT1, que é tipicamente associado a tumores de Wilms que exibem fenótipos mais agressivos ou estromais. No entanto, o tumor Wilms11 apresentou diferenciação estromal significativa, com grandes áreas de diferenciação rabdomiomatosa, indicativas da presença de elementos mesenquimais no tumor. A presença do WT1 de tipo selvagem, aliada à diferenciação estromal do tumor, oferece um modelo único para a compreensão da biologia do tumor de Wilms em casos em que não há mutações no WT1.

Estudos genéticos do Wilms11 demonstraram que essa linhagem celular carrega uma mutação específica do tumor no CTNNB1, o gene que codifica a β-catenina, que desempenha um papel crucial na via de sinalização Wnt. No Wilms11, essa mutação afeta a serina 45, um local-chave de fosforilação envolvido na degradação da β-catenina. A mutação no CTNNB1 resulta na estabilização da β-catenina, levando ao seu acúmulo e à ativação constitutiva da via de sinalização Wnt, um fator determinante da proliferação celular e da tumorigênese. Isso torna o Wilms11 um importante modelo para o estudo da interação entre a sinalização Wnt e o desenvolvimento do tumor de Wilms, particularmente nos casos em que o WT1 permanece intacto.

Análises proteômicas do Wilms11 revelaram a ativação de vários receptores de tirosina quinase (RTKs), incluindo PDGFRβ e AXL, que estão envolvidos na promoção do crescimento e da sobrevivência das células tumorais. Vias de sinalização a jusante, como as vias MAPK e PI3K/AKT, também são ativadas nas células Wilms11, contribuindo para seu comportamento tumorigênico. A capacidade das células Wilms11 de sofrerem diferenciação mesenquimal, particularmente diferenciação rabdomiomatosa, destaca seu potencial como modelo para o estudo dos componentes mesenquimais do tumor de Wilms. De modo geral, o Wilms11 serve como uma ferramenta valiosa para investigar os mecanismos moleculares que impulsionam a tumorigênese de Wilms na ausência de mutações no WT1, mas no contexto da ativação da via Wnt.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.