Wilms10M

A linhagem celular Wilms10M foi estabelecida a partir de um nódulo pulmonar metastático de um paciente com tumor de Wilms (nefroblastoma). Assim como sua contraparte do tumor primário, a Wilms10T, a linhagem celular Wilms10M é caracterizada por uma deleção homozigótica do gene WT1, resultando na ausência completa da proteína WT1. O WT1 é essencial para o desenvolvimento normal do rim, e sua deleção está associada a um comportamento tumoral mais agressivo, particularmente em casos metastáticos. Além disso, as células Wilms10M apresentam perda de heterozigosidade (LOH) na região cromossômica 11p15, que inclui o gene IGF2, contribuindo ainda mais para as propriedades malignas dessas células.

As células Wilms10M mantêm um cariótipo estável, sem grandes rearranjos cromossômicos, exceto pela deleção específica da região do WT1. Essa linhagem celular, derivada de tecido metastático, é particularmente valiosa para o estudo dos mecanismos moleculares que impulsionam a metástase no tumor de Wilms. As células apresentam características mesenquimais, expressando marcadores como a vimentina, ao mesmo tempo em que não apresentam marcadores epiteliais como a citoqueratina, o que indica sua origem no componente estromal do tumor.

As pesquisas sobre o Wilms10M têm se concentrado nas vias de sinalização ativas nessas células metastáticas. Análises proteômicas demonstraram a ativação de vários receptores de tirosina quinase (RTKs), incluindo IGF1R, PDGFRβ e AXL, que estão envolvidos na promoção da sobrevivência celular, proliferação e potencial metastático. As vias de sinalização a jusante MAPK e PI3K/AKT também são ativadas, desempenhando um papel fundamental na manutenção do fenótipo invasivo e metastático das células do Wilms10M. Dada sua origem metastática, o Wilms10M é um modelo essencial para compreender os eventos moleculares subjacentes à metástase do tumor de Wilms e para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas direcionadas contra a doença metastática.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.