Wilms10M

Linia komórkowa Wilms10M została utworzona z przerzutowego guzka płuca pacjenta z guzem Wilmsa (nephroblastoma). Podobnie jak jej pierwotny odpowiednik, Wilms10T, linia komórkowa Wilms10M charakteryzuje się homozygotyczną delecją genu WT1, co skutkuje całkowitym brakiem białka WT1. WT1 jest niezbędny do prawidłowego rozwoju nerek, a jego delecja wiąże się z bardziej agresywnym zachowaniem nowotworu, szczególnie w przypadku przerzutów. Dodatkowo, komórki Wilms10M wykazują utratę heterozygotyczności (LOH) w regionie chromosomalnym 11p15, który obejmuje gen IGF2, co dodatkowo przyczynia się do złośliwych właściwości tych komórek.

Komórki Wilmsa10M utrzymują stabilny kariotyp bez większych rearanżacji chromosomalnych poza specyficzną delecją regionu WT1. Ta linia komórkowa, pochodząca z tkanki przerzutowej, jest szczególnie cenna do badania mechanizmów molekularnych, które napędzają przerzuty w guzie Wilmsa. Komórki wykazują cechy mezenchymalne, wyrażając markery takie jak wimentyna, przy jednoczesnym braku markerów nabłonkowych, takich jak cytokeratyna, co wskazuje na ich pochodzenie ze zrębu guza.

Badania nad Wilms10M koncentrowały się na szlakach sygnałowych, które są aktywne w tych komórkach przerzutowych. Analizy proteomiczne wykazały aktywację kilku receptorowych kinaz tyrozynowych (RTK), w tym IGF1R, PDGFRβ i AXL, które są zaangażowane w promowanie przeżycia komórek, proliferacji i potencjału przerzutowego. Szlaki sygnałowe MAPK i PI3K/AKT są również aktywowane, odgrywając kluczową rolę w utrzymaniu inwazyjnego i przerzutowego fenotypu komórek Wilms10M. Biorąc pod uwagę jego przerzutowe pochodzenie, Wilms10M jest niezbędnym modelem do zrozumienia zdarzeń molekularnych leżących u podstaw przerzutów guza Wilmsa i do opracowania ukierunkowanych strategii terapeutycznych przeciwko chorobie przerzutowej.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym