Wilms3

Linia komórkowa Wilms3 została utworzona z pierwotnego guza Wilmsa u pacjenta pediatrycznego, charakteryzującego się mutacją somatyczną WT1. W przeciwieństwie do wielu innych linii komórkowych guza Wilmsa, Wilms3 posiada heterozygotyczną mutację przesunięcia ramki w genie WT1 (c.1293-1294insA, p.V432SfsX87), prowadzącą do produkcji skróconego białka WT1. Ta częściowa utrata funkcji WT1 jest związana z rozwojem guzów, które wykazują fenotyp zrębu lub mezenchymalny. Jednak mutacja WT1 w Wilms3 nie jest homozygotyczna, co zwiększa złożoność jej badania, ponieważ zachowuje pewną funkcję WT1, która może wpływać na biologię guza inaczej niż linie komórkowe z całkowitą utratą WT1.

Wilms3 jest również nosicielem mutacji w genie CTNNB1, w szczególności wpływającej na treoninę 41 (p.T41A), która odgrywa kluczową rolę w szlaku sygnałowym Wnt. Mutacja ta stabilizuje β-kateninę, zapobiegając jej degradacji i prowadząc do konstytutywnej aktywacji szlaku Wnt. Utrzymująca się aktywacja sygnalizacji Wnt napędza proliferację komórek i przyczynia się do nowotworzenia w Wilms3, co czyni go kluczowym modelem do badania wpływu mutacji CTNNB1 w kontekście częściowo funkcjonalnego tła WT1.

Fenotypowo, komórki Wilms3 wykazują morfologię mezenchymalną, ekspresję wimentyny i brak cytokeratyny, co jest zgodne z cechami zrębu obserwowanymi w pierwotnym guzie. Komórki te wykazują ograniczony potencjał różnicowania, ze zdolnością do różnicowania mezenchymalnego w określonych warunkach. Analizy proteomiczne Wilms3 ujawniły aktywację kilku receptorowych kinaz tyrozynowych (RTK), w tym PDGFRβ i AXL, które wspierają przeżycie i proliferację komórek. Dodatkowo, aktywowane są dalsze szlaki sygnałowe, takie jak MAPK i PI3K/AKT, wzmacniając złośliwe właściwości komórek Wilms3.

Jednym z unikalnych aspektów Wilms3 jest jego częściowa funkcjonalność WT1, co zapewnia odrębną perspektywę na to, w jaki sposób mutacje WT1 przyczyniają się do biologii guza Wilmsa, gdy mutacja nie jest kompletna. Wzajemne oddziaływanie między WT1 i sygnalizacją Wnt w Wilms3 oferuje cenną okazję do zbadania zniuansowanych ról, jakie te szlaki odgrywają w rozwoju nowotworu. Ogólnie rzecz biorąc, Wilms3 służy jako ważny model do badania mechanizmów molekularnych leżących u podstaw guza Wilmsa w obecności częściowej utraty WT1 i konstytutywnej aktywacji szlaku Wnt.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym