Wilms3

สายพันธุ์เซลล์ Wilms3 ถูกสร้างขึ้นจากเนื้องอก Wilms ชนิดปฐมภูมิในผู้ป่วยเด็ก ซึ่งมีลักษณะเด่นคือการกลายพันธุ์ของยีน WT1 ในเซลล์ร่างกายแตกต่างจากเซลล์ไลน์ของเนื้องอก Wilms หลายๆ ชนิด Wilms3 มีการกลายพันธุ์แบบ frameshift ที่เป็น heterozygous ในยีน WT1 (c.1293-1294insA, p.V432SfsX87) ซึ่งนำไปสู่การผลิตโปรตีน WT1 ที่ถูกตัดทอน การสูญเสียการทำงานของ WT1 บางส่วนนี้มีความสัมพันธ์กับการพัฒนาของเนื้องอกที่มีลักษณะเป็น stromal หรือ mesenchymalอย่างไรก็ตาม การกลายพันธุ์ของ WT1 ใน Wilms3 ไม่ได้เป็นแบบโฮโมไซกัส ซึ่งเพิ่มความซับซ้อนในการศึกษา เนื่องจากยังคงมีหน้าที่บางอย่างของ WT1 ที่สามารถส่งผลต่อชีววิทยาของเนื้องอกได้แตกต่างจากเซลล์ไลน์ที่มีการสูญเสีย WT1 อย่างสมบูรณ์

Wilms3 ยังมีการกลายพันธุ์ในยีน CTNNB1 โดยเฉพาะที่ตำแหน่งธีโรนีน 41 (p.T41A) ซึ่งมีบทบาทสำคัญในเส้นทางการส่งสัญญาณ Wnt การกลายพันธุ์นี้ทำให้ β-Catenin มีเสถียรภาพมากขึ้น ป้องกันการสลายตัวและนำไปสู่การกระตุ้นเส้นทาง Wnt อย่างต่อเนื่องการกระตุ้นอย่างต่อเนื่องของสัญญาณ Wnt ส่งเสริมการเพิ่มจำนวนของเซลล์และมีส่วนทำให้เกิดการเกิดเนื้องอกใน Wilms3 ทำให้เป็นแบบจำลองสำคัญสำหรับการศึกษาผลกระทบของการกลายพันธุ์ CTNNB1 ในบริบทของพื้นหลัง WT1 ที่ทำงานบางส่วน

ในเชิงฟีโนไทป์ เซลล์ Wilms3 แสดงลักษณะรูปร่างคล้ายเมเซนไคม์ โดยแสดงออกของวีเมนตินและขาดไซโตเคราติน ซึ่งสอดคล้องกับลักษณะของสโตรมาที่พบในเนื้องอกต้นกำเนิด เซลล์เหล่านี้แสดงศักยภาพในการเปลี่ยนแปลงไปเป็นเซลล์ชนิดอื่นได้จำกัด โดยสามารถเปลี่ยนแปลงไปเป็นเซลล์เมเซนไคม์ได้บางส่วนภายใต้สภาวะเฉพาะการวิเคราะห์โปรตีโอมิกส์ของ Wilms3 ได้เปิดเผยการกระตุ้นของไทโรซีนไคเนสชนิดรีเซพเตอร์ (RTKs) หลายชนิด รวมถึง PDGFRβ และ AXL ซึ่งสนับสนุนการอยู่รอดและการเพิ่มจำนวนของเซลล์ นอกจากนี้ เส้นทางสัญญาณที่อยู่ถัดลงมา เช่น MAPK และ PI3K/AKT ยังถูกกระตุ้นด้วย ซึ่งเสริมคุณสมบัติที่เป็นมะเร็งของเซลล์ Wilms3

ลักษณะเฉพาะอย่างหนึ่งของ Wilms3 คือความสามารถในการทำงานบางส่วนของ WT1 ซึ่งให้มุมมองที่แตกต่างเกี่ยวกับวิธีที่การกลายพันธุ์ของ WT1 มีส่วนทำให้เกิดชีววิทยาของเนื้องอก Wilms เมื่อการกลายพันธุ์ไม่สมบูรณ์ การมีปฏิสัมพันธ์ระหว่าง WT1 และสัญญาณ Wnt ใน Wilms3 มอบโอกาสอันมีค่าในการศึกษาบทบาทที่ละเอียดอ่อนของเส้นทางเหล่านี้ในการพัฒนาของเนื้องอกโดยรวมแล้ว Wilms3 ทำหน้าที่เป็นแบบจำลองที่สำคัญสำหรับการศึกษาเชิงลึกเกี่ยวกับกลไกระดับโมเลกุลที่อยู่เบื้องหลังเนื้องอก Wilms ในสภาวะที่มีการสูญเสีย WT1 บางส่วนและการกระตุ้นเส้นทาง Wnt อย่างต่อเนื่อง

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.