Wilms3

קו התאים Wilms3 הוקם מגידול Wilms ראשוני בחולה ילדים, המאופיין במוטציה סומטית WT1. בניגוד לקווי תאים רבים אחרים של גידול וילמס, Wilms3 נושא מוטציה הטרוזיגוטית של שינוי מסגרת בקודון (c.1293-1294insA, p.V432SfsX87) בגן WT1, המובילה לייצור חלבון WT1 מקוצר. אובדן חלקי זה של תפקוד WT1 קשור להתפתחות גידולים המציגים פנוטיפ סטרומתי או מזנכימלי. עם זאת, המוטציה ב-WT1 ב-Wilms3 אינה הומוזיגוטית, מה שמסבך את מחקרה, שכן היא שומרת על חלק מתפקוד ה-WT1 שיכול להשפיע על הביולוגיה של הגידול באופן שונה בהשוואה לקווי תאים עם אובדן מוחלט של WT1.

Wilms3 נושא גם מוטציה בגן CTNNB1, המשפיעה באופן ספציפי על תראונין 41 (p.T41A), הממלא תפקיד קריטי במסלול האיתות Wnt. מוטציה זו מייצבת את β-Catenin, מונעת את פירוקו ומובילה להפעלה קונסטיטוטבית של מסלול Wnt. הפעלה מתמשכת של מסלול Wnt מובילה לשגשוג תאים ותורמת להתפתחות גידולים ב-Wilms3, מה שהופך אותו למודל מרכזי לחקר ההשפעה של מוטציות CTNNB1 בהקשר של רקע WT1 פונקציונלי חלקית.

מבחינה פנוטיפית, תאי Wilms3 מציגים מורפולוגיה דמוית מזנכימלית, מבטאים וימנטין וחסרים ציטוקראטין, בהתאם למאפייני הסטרומה שנצפו בגידול המקורי. תאים אלה מציגים פוטנציאל התמיינות מוגבל, עם יכולת לעבור התמיינות מזנכימלית מסוימת בתנאים ספציפיים. ניתוחים פרוטאומיים של Wilms3 חשפו הפעלה של מספר קולטני טירוזין קינאז (RTK), כולל PDGFRβ ו-AXL, התומכים בהישרדות התאים ובהתרבותם. בנוסף, מסלולי איתות במורד הזרם כגון MAPK ו-PI3K/AKT מופעלים, מה שמחזק את התכונות הממאירות של תאי Wilms3.

מאפיין ייחודי של Wilms3 הוא תפקודו החלקי של WT1, המספק פרספקטיבה ייחודית על האופן שבו מוטציות WT1 תורמות לביולוגיה של גידול וילמס כאשר המוטציה אינה מלאה. האינטראקציה בין WT1 לאיתות Wnt ב-Wilms3 מציעה הזדמנות חשובה לחקור את התפקידים המורכבים שממלאים מסלולים אלה בהתפתחות הגידול. בסך הכל, Wilms3 משמש מודל חשוב לחקר המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס גידול וילמס בנוכחות אובדן חלקי של WT1 והפעלה קונסטיטוטבית של מסלול Wnt.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו