Wilms3

A Wilms3 sejtvonalat egy gyermekbeteg primer Wilms-tumorából hozták létre, amelyet szomatikus WT1 mutáció jellemez. Sok más Wilms-tumor sejtvonaltól eltérően a Wilms3 heterozigóta frameshift mutációt tartalmaz a WT1 génben (c.1293-1294insA, p.V432SfsX87), ami egy csonka WT1 fehérje termelődéséhez vezet. A WT1 funkciójának ez a részleges elvesztése olyan tumorok kialakulásával jár, amelyek stromális vagy mesenchymális fenotípust mutatnak. A Wilms3-ban a WT1 mutáció azonban nem homozigóta, ami bonyolultabbá teszi a vizsgálatát, mivel megtartja a WT1 bizonyos funkcióját, amely a teljes WT1-vesztéssel rendelkező sejtvonalakhoz képest másképp befolyásolhatja a tumorbiológiát.

A Wilms3 a CTNNB1 génben is hordoz egy mutációt, amely kifejezetten a 41-es treonin (p.T41A), a Wnt jelátviteli útvonalban játszott kritikus szerepet érinti. Ez a mutáció stabilizálja a β-katenint, megakadályozva annak degradációját, és a Wnt-útvonal konstitutív aktiválódásához vezet. A Wnt jelátvitel tartós aktivációja hajtja a sejtek proliferációját és hozzájárul a tumorigenezishez a Wilms3-ban, ami kulcsfontosságú modellé teszi a CTNNB1 mutációk hatásának tanulmányozására egy részben funkcionális WT1 háttérrel összefüggésben.

Fenotípusosan a Wilms3 sejtek mesenchymális morfológiát mutatnak, vimentint expresszálnak, és hiányzik belőlük a citokeratin, ami összhangban van az eredeti tumorban megfigyelt stromális jellemzőkkel. Ezek a sejtek korlátozott differenciálódási potenciált mutatnak, és bizonyos körülmények között képesek némi mesenchymális differenciálódásra. A Wilms3 proteomikai elemzései számos receptor-tirozin-kináz (RTK), köztük a PDGFRβ és az AXL aktiválódását mutatták ki, amelyek támogatják a sejtek túlélését és proliferációját. Emellett olyan downstream jelátviteli útvonalak, mint a MAPK és a PI3K/AKT aktiválódnak, ami erősíti a Wilms3 sejtek rosszindulatú tulajdonságait.

A Wilms3 egyik egyedülálló aspektusa a WT1 részleges funkcionalitása, ami külön perspektívát nyújt arra vonatkozóan, hogy a WT1 mutációk hogyan járulnak hozzá a Wilms-tumor biológiájához, amikor a mutáció nem teljes. A Wilms3-ban a WT1 és a Wnt jelátvitel közötti kölcsönhatás értékes lehetőséget kínál az ezen útvonalaknak a daganatok fejlődésében játszott árnyalt szerepének tanulmányozására. Összességében a Wilms3 fontos modellként szolgál a Wilms-tumor hátterében álló molekuláris mechanizmusok vizsgálatához a részleges WT1-vesztés és a konstitutív Wnt-útvonal aktiválódása esetén.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban