ويلمز 3

تم إنشاء سلالة خلايا ويلمز3 من ورم ويلمز الأولي لدى مريض طفل، والذي يتميز بطفرة جسدية في جين WT1. وعلى عكس العديد من خطوط خلايا أورام ويلمز الأخرى، فإن سلالة ويلمز3 تحتوي على طفرة متغايرة الزيجوت في جين WT1 (ج 1293-1294insA، ص V432SfsX87)، مما يؤدي إلى إنتاج بروتين WT1 مبتور. ويرتبط هذا الفقدان الجزئي لوظيفة WT1 بتطور الأورام التي تُظهر نمطًا ظاهريًا لحميًا أو متوسطيًا. ومع ذلك، فإن طفرة WT1 في ويلمز3 ليست متماثلة، مما يضيف تعقيدًا لدراستها، حيث تحتفظ ببعض وظائف WT1 التي يمكن أن تؤثر على بيولوجيا الورم بشكل مختلف مقارنةً بخطوط الخلايا التي تعاني من فقدان كامل لبروتين WT1.

يحمل ويلمز3 أيضًا طفرة في جين CTNNB1 تؤثر تحديدًا على الثريونين 41 (p.T41A)، والذي يلعب دورًا حاسمًا في مسار إشارات Wnt. تعمل هذه الطفرة على تثبيت β-Catenin، مما يمنع تدهوره ويؤدي إلى التنشيط المستمر لمسار Wnt. ويؤدي التنشيط المستمر لإشارات Wnt إلى تكاثر الخلايا ويساهم في تكاثر الأورام في ويلمز3، مما يجعله نموذجًا رئيسيًا لدراسة تأثير طفرات CTNNB1 في سياق خلفية WT1 الوظيفية جزئيًا.

من الناحية النمطية، تُظهر خلايا ويلمز3 مورفولوجيا شبيهة بالأنسجة الوسيطة تعبر عن الفيمينتين وتفتقر إلى السيتوكراتين، بما يتوافق مع الخصائص اللحمية التي لوحظت في الورم الأصلي. تُظهر هذه الخلايا قدرة محدودة على التمايز، مع القدرة على الخضوع لبعض التمايز الوسيمي الوسيطي في ظل ظروف محددة. وقد كشفت التحليلات البروتينية لويلمز3 عن تنشيط العديد من مستقبلات التيروزين كيناز (RTKs)، بما في ذلك PDGFRβ وAXL، التي تدعم بقاء الخلايا وتكاثرها. وبالإضافة إلى ذلك، يتم تنشيط مسارات الإشارات اللاحقة مثل MAPK وPI3K/AKT، مما يعزز الخصائص الخبيثة لخلايا ويلمز3.

ويتمثل أحد الجوانب الفريدة من نوعها في ويلمز3 في وظيفة WT1 الجزئية، والتي توفر منظوراً متميزاً حول كيفية مساهمة طفرات WT1 في بيولوجيا ورم ويلمز عندما لا تكون الطفرة كاملة. ويوفر التفاعل بين إشارات WT1 وإشارات Wnt في ويلمز3 فرصة قيّمة لدراسة الأدوار الدقيقة التي تلعبها هذه المسارات في تطور الورم. وبشكل عام، يُعتبر ويلمز3 نموذجاً مهماً لدراسة الآليات الجزيئية الكامنة وراء ورم ويلمز في وجود فقدان جزئي لـ WT1 وتنشيط مسار Wnt التأسيسي.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان