Wilms3

Wilms3 hücre hattı, somatik WT1 mutasyonu ile karakterize edilen bir pediatrik hastadaki primer Wilms tümöründen oluşturulmuştur. Diğer birçok Wilms tümör hücre hattından farklı olarak Wilms3, WT1 geninde heterozigot bir çerçeve kayması mutasyonu (c.1293-1294insA, p.V432SfsX87) barındırır ve kesilmiş bir WT1 proteininin üretilmesine yol açar. WT1 fonksiyonunun bu kısmi kaybı, stromal veya mezenkimal fenotip gösteren tümörlerin gelişimi ile ilişkilidir. Bununla birlikte, Wilms3'teki WT1 mutasyonu homozigot değildir, bu da çalışmasına karmaşıklık katar, çünkü tam WT1 kaybı olan hücre hatlarına kıyasla tümör biyolojisini farklı şekilde etkileyebilecek bazı WT1 işlevlerini korur.

Wilms3 ayrıca CTNNB1 geninde, özellikle Wnt sinyal yolunda kritik bir rol oynayan treonin 41'i (p.T41A) etkileyen bir mutasyon taşır. Bu mutasyon β-Catenin'i stabilize ederek parçalanmasını önler ve Wnt yolunun yapısal aktivasyonuna yol açar. Wnt sinyalinin sürekli aktivasyonu hücre çoğalmasını sağlar ve Wilms3'te tümörigeneze katkıda bulunur, bu da onu CTNNB1 mutasyonlarının kısmen işlevsel bir WT1 arka planı bağlamında etkisini incelemek için önemli bir model haline getirir.

Fenotipik olarak, Wilms3 hücreleri, orijinal tümörde gözlenen stromal özelliklerle tutarlı olarak, vimentin eksprese eden ve sitokeratin içermeyen mezenkimal benzeri bir morfoloji sergiler. Bu hücreler, belirli koşullar altında bir miktar mezenkimal farklılaşma geçirme kabiliyeti ile sınırlı farklılaşma potansiyeli göstermektedir. Wilms3'ün proteomik analizleri, PDGFRβ ve AXL dahil olmak üzere hücre sağkalımını ve çoğalmasını destekleyen çeşitli reseptör tirozin kinazların (RTK'lar) aktivasyonunu ortaya çıkarmıştır. Ek olarak, MAPK ve PI3K/AKT gibi aşağı akış sinyal yolları aktive edilerek Wilms3 hücrelerinin kötü huylu özelliklerini güçlendirir.

Wilms3'ün benzersiz bir yönü, kısmi WT1 işlevselliğidir; bu da mutasyon tamamlanmadığında WT1 mutasyonlarının Wilms tümör biyolojisine nasıl katkıda bulunduğuna dair farklı bir bakış açısı sağlar. Wilms3'te WT1 ve Wnt sinyali arasındaki etkileşim, bu yolakların tümör gelişiminde oynadığı nüanslı rolleri incelemek için değerli bir fırsat sunmaktadır. Genel olarak Wilms3, kısmi WT1 kaybı ve konstitütif Wnt yolağı aktivasyonu varlığında Wilms tümörünün altında yatan moleküler mekanizmaları araştırmak için önemli bir model olarak hizmet etmektedir.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın