Wilms8

A Wilms8 sejtvonal egy gyermekbeteg primer Wilms-tumorából származik, amely csíravonalbeli WT1-mutációval rendelkezik. Ezt a sejtvonalat a WT1 gén homozigóta nonszensz mutációja jellemzi (c.1168 C>T, p.R390X), amely a WT1 funkció teljes elvesztéséhez vezet. A WT1 döntő fontosságú a normális vesefejlődéshez, és inaktivációja a Wilms-tumor bizonyos agresszív altípusaiban gyakori, különösen azokban, amelyek mesenchymális differenciálódást mutatnak. A Wilms8 ezért értékes modell a WT1 elvesztésének a tumorigenezisre gyakorolt hatásának tanulmányozására, különösen a kifejezett stromális komponenssel kialakuló Wilms-tumorok összefüggésében.

A WT1 mutáción kívül a Wilms8 sejtek mutációt hordoznak a CTNNB1 génben (p.S45A), amely a β-katenint, a Wnt jelátviteli útvonal kulcsfontosságú szabályozóját kódolja. A 45-ös szerin mutáció megzavarja a β-Catenin degradációjához vezető normál foszforilációs folyamatot, ami stabilizálódását és felhalmozódását okozza a sejtmagban. Ez a Wnt-szignalizáció konstitutív aktiválódását eredményezi, ami a sejtproliferációt hajtja és hozzájárul a Wilms8 sejtvonal onkogén tulajdonságaihoz. A Wilms8-ban a WT1 elvesztése és az aberráns Wnt-szignalizáció közötti kölcsönhatás kulcsfontosságú modellé teszi a Wilms8-at a Wilms-tumor biológiájában ezen útvonalak mögött meghúzódó molekuláris mechanizmusok megértéséhez.

A Wilms8 sejtek mesenchymális fenotípust mutatnak, amelyet a vimentin expressziója és az epithelialis markerek, például a citokeratin hiánya jellemez. Ez megegyezik az eredeti tumorban megfigyelt stromális differenciálódással. A sejtek korlátozottan képesek további mesenchymális differenciálódásra, például izomszerű sejtek kialakítására bizonyos körülmények között. A Wilms8 proteomikai elemzései több receptor-tirozin-kináz (RTK), köztük a PDGFRβ és az AXL aktiválódását mutatták ki, amelyek olyan kulcsfontosságú folyamatokban vesznek részt, mint a sejtek túlélése, migrációja és proliferációja. A downstream jelátviteli útvonalak, különösen a MAPK és a PI3K/AKT útvonalak aktiválása tovább hozzájárul a Wilms8 sejtek agresszív jellemzőihez.

Összességében a Wilms8 sejtvonal alapvető eszközként szolgál a WT1 elvesztése és az aberráns Wnt-szignalizáció által vezérelt Wilms-tumor molekuláris alapjainak vizsgálatához. Genetikai és fenotípusos jellemzői robusztus platformmá teszik e kritikus útvonalak közötti kölcsönhatás tanulmányozására és a stromális komponensű Wilms-tumorok potenciális terápiás célpontjainak azonosítására.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban