Wilms8

Wilms8-solulinja on peräisin primaarisesta Wilmsin kasvaimesta, joka on peräisin lapsipotilaalta, jolla on WT1-mutaatio. Tälle solulinjalle on ominaista homotsygoottinen nonsense-mutaatio WT1-geenissä (c.1168 C>T, p.R390X), joka johtaa WT1:n toiminnan täydelliseen menetykseen. WT1 on ratkaisevan tärkeä munuaisten normaalin kehityksen kannalta, ja sen inaktivoituminen on yleinen piirre tietyissä Wilmsin kasvaimen aggressiivisissa alatyypeissä, erityisesti niissä, joissa esiintyy mesenkymaalista erilaistumista. Wilms8 tarjoaa näin ollen arvokkaan mallin, jonka avulla voidaan tutkia WT1:n menetyksen vaikutuksia kasvainten syntyyn, erityisesti sellaisten Wilms-kasvainten yhteydessä, joissa on voimakas stroomakomponentti.

WT1-mutaation lisäksi Wilms8-soluissa on mutaatio CTNNB1-geenissä (p.S45A), joka koodaa β-kateniinia, joka on keskeinen Wnt-signalointireitin säätelijä. Mutaatio seriini 45:ssä häiritsee normaalia fosforylaatioprosessia, joka johtaa β-kateniinin hajoamiseen, ja aiheuttaa sen stabiloitumisen ja kertymisen tumaan. Tämä johtaa Wnt-signaalin konstitutiiviseen aktivoitumiseen, mikä edistää solujen lisääntymistä ja vaikuttaa osaltaan Wilms8-solulinjan onkogeenisiin ominaisuuksiin. WT1:n menetyksen ja poikkeavan Wnt-signalisaation välinen vuorovaikutus Wilms8:ssa tekee siitä ratkaisevan tärkeän mallin näiden reittien taustalla olevien molekyylimekanismien ymmärtämiseksi Wilmsin kasvainten biologiassa.

Wilms8-soluilla on mesenkymaalinen fenotyyppi, jolle on ominaista vimentiinin ilmentyminen ja epiteelin merkkiaineiden, kuten sytokeratiinin, puuttuminen. Tämä vastaa alkuperäisessä kasvaimessa havaittua stroomaalista erilaistumista. Solut osoittavat rajoitettua kykyä edetä mesenkimaalisessa erilaistumisessa, kuten muodostaa lihaksen kaltaisia soluja tietyissä olosuhteissa. Wilms8:n proteomianalyysit ovat paljastaneet useiden reseptorityrosiinikinaasien (RTK), kuten PDGFRβ:n ja AXL:n, aktivoituneen, ja ne osallistuvat keskeisiin prosesseihin, kuten solujen eloonjäämiseen, migraatioon ja proliferaatioon. Seuraavien signaalireittien, erityisesti MAPK- ja PI3K/AKT-reittien, aktivoituminen vaikuttaa edelleen Wilms8-solujen aggressiivisiin ominaisuuksiin.

Kaiken kaikkiaan Wilms8-solulinja toimii olennaisena välineenä WT1:n menetyksen ja poikkeavan Wnt-signalisaation aiheuttaman Wilms-kasvaimen molekulaarisen perustan tutkimisessa. Sen geneettiset ja fenotyyppiset ominaisuudet tekevät siitä vankan alustan näiden kriittisten reittien välisen vuorovaikutuksen tutkimiseen ja mahdollisten terapeuttisten kohteiden tunnistamiseen Wilmsin kasvaimissa, joissa on stroomakomponentti.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa