Wilms2

Wilms2-solulinja on peräisin primaarisesta Wilmsin kasvaimesta, joka on peräisin lapsipotilaalta, jolla on WT1-mutaatio. Tälle solulinjalle on ominaista homotsygoottinen nonsense-mutaatio WT1-geenissä (c.1084 C>T, p.R362X), joka johtaa typistetyn, ei-toiminnallisen WT1-proteiinin tuotantoon. Munuaisten kehitykselle välttämättömän WT1-geenin menetys on tunnusomaista tietyille Wilmsin kasvaimen alatyypeille, erityisesti niille, jotka liittyvät mesenkymaaliseen tai stroomaaliseen erilaistumiseen. Wilms2-solulinja on merkittävä malli WT1:n menetyksen aiheuttamien kasvainten syntyprosessien tutkimiseen, erityisesti sellaisten Wilms-kasvainten yhteydessä, joissa on jäljellä muita kriittisiä geneettisiä ominaisuuksia.

Wilms2-soluissa on mutaatioita myös CTNNB1-geenissä, joka koodaa β-kateniinia, joka on Wnt-signalointireitin keskeinen komponentti. Nämä mutaatiot, jotka vaikuttavat erityisesti seriini 45:een, johtavat β-kateniinin stabiloitumiseen ja kertymiseen, mikä johtaa Wnt-reitin konstitutiiviseen aktivoitumiseen. Tämä aktivaatio on tunnetusti Wilmsin kasvaimen solujen lisääntymisen ja kasvainten synnyn ajuri, minkä vuoksi Wilms2 on arvokas malli sen ymmärtämiseksi, miten poikkeava Wnt-signalointi vaikuttaa kasvainten kehittymiseen ja etenemiseen, joissa on WT1-mutaatioita.

Fenotyypiltään Wilms2:n solut ovat mesenkymaalisen morfologian kaltaisia, ne ilmentävät vimentiiniä ja niistä puuttuvat epiteelin merkkiaineet, kuten sytokeratiini. Tämä vastaa kasvaimen stroomaattisia ominaisuuksia ja korostaa WT1:n roolia mesenkymaalisen ja epiteelin välisten siirtymien säätelyssä munuaisten kehityksen aikana. Wilms2:n proteomianalyyseissä on havaittu useiden reseptorityrosiinikinaasien (RTK), kuten PDGFRβ:n ja AXL:n, aktivoituminen, joiden tiedetään tukevan kasvainsolujen selviytymistä ja lisääntymistä. Lisäksi myös MAPK:n ja PI3K/AKT:n kaltaiset jatkoketjureitit aktivoituvat, mikä edistää entisestään Wilms2-solujen pahanlaatuisia ominaisuuksia.

Kaiken kaikkiaan Wilms2-solulinja toimii olennaisena välineenä WT1:n menetyksen ja poikkeavan Wnt-signalisaation aiheuttaman Wilmsin kasvaimen molekyylimekanismien tutkimisessa. Sen geneettiset ja fenotyyppiset ominaisuudet tarjoavat vankan alustan mahdollisten terapeuttisten kohteiden tutkimiseen ja keskeisten signaalireittien roolin ymmärtämiseen sellaisten Wilmsin kasvainten patologiassa, joilla on mesenkymaalinen komponentti.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa