Wilms2

Linia komórkowa Wilms2 została uzyskana z pierwotnego guza Wilmsa u pacjenta pediatrycznego z mutacją germinalną WT1. Ta linia komórkowa charakteryzuje się homozygotyczną mutacją nonsensowną w genie WT1 (c.1084 C>T, p.R362X), która powoduje produkcję skróconego, niefunkcjonalnego białka WT1. Utrata funkcjonalnego WT1, genu niezbędnego do rozwoju nerek, jest cechą charakterystyczną niektórych podtypów guza Wilmsa, szczególnie tych związanych z różnicowaniem mezenchymalnym lub zrębowym. Linia komórkowa Wilms2 jest ważnym modelem do badania procesów nowotworowych napędzanych utratą WT1, szczególnie w kontekście guzów Wilmsa, które zachowują inne krytyczne cechy genetyczne.

Komórki Wilms2 są również nosicielami mutacji w genie CTNNB1, który koduje β-kateninę, kluczowy składnik szlaku sygnałowego Wnt. Mutacje te, w szczególności wpływające na serynę 45, prowadzą do stabilizacji i akumulacji β-kateniny, co skutkuje konstytutywną aktywacją szlaku Wnt. Aktywacja ta jest znanym czynnikiem napędzającym proliferację komórek i nowotworzenie w guzie Wilmsa, dzięki czemu Wilms2 jest cennym modelem do zrozumienia, w jaki sposób nieprawidłowa sygnalizacja Wnt przyczynia się do rozwoju i progresji nowotworów z mutacjami WT1.

Pod względem fenotypu, komórki Wilms2 wykazują morfologię podobną do mezenchymalnej, wykazując ekspresję wimentyny i brak markerów nabłonkowych, takich jak cytokeratyna. Jest to zgodne z charakterystyką zrębu guza i podkreśla rolę WT1 w regulacji przemian mezenchymalno-nabłonkowych podczas rozwoju nerek. Analizy proteomiczne Wilms2 zidentyfikowały aktywację kilku receptorowych kinaz tyrozynowych (RTK), w tym PDGFRβ i AXL, o których wiadomo, że wspierają przeżycie i proliferację komórek nowotworowych. Dodatkowo aktywowane są również szlaki niższego rzędu, takie jak MAPK i PI3K/AKT, co dodatkowo przyczynia się do złośliwych właściwości komórek Wilms2.

Ogólnie rzecz biorąc, linia komórkowa Wilms2 służy jako podstawowe narzędzie do badania mechanizmów molekularnych guza Wilmsa spowodowanego utratą WT1 i nieprawidłową sygnalizacją Wnt. Jej cechy genetyczne i fenotypowe stanowią solidną platformę do badania potencjalnych celów terapeutycznych i zrozumienia roli kluczowych szlaków sygnałowych w patologii guzów Wilmsa z komponentem mezenchymalnym.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym