Wilms2

สายเซลล์ Wilms2 ถูกแยกได้จากเนื้องอก Wilms ชนิดปฐมภูมิในผู้ป่วยเด็กที่มีการกลายพันธุ์ WT1 ในสายพันธุกรรมปกติ สายเซลล์นี้มีลักษณะเด่นคือการกลายพันธุ์แบบ nonsense ในยีน WT1 แบบโฮโมไซโกต (c.1084 C>T, p.R362X) ซึ่งส่งผลให้เกิดการผลิตโปรตีน WT1 ที่ขาดบางส่วนและไม่สามารถทำงานได้การสูญเสียการทำงานของ WT1 ซึ่งเป็นยีนที่จำเป็นต่อการพัฒนาของไต เป็นลักษณะเด่นของชนิดย่อยบางชนิดของเนื้องอกวิลส์ม์ โดยเฉพาะชนิดที่เกี่ยวข้องกับภาวะการเปลี่ยนแปลงของเซลล์เป็นเนื้อเยื่อเกี่ยวพันหรือเนื้อเยื่อพื้นฐาน (mesenchymal หรือ stromal differentiation) สายเซลล์ Wilms2 เป็นแบบจำลองที่สำคัญสำหรับการศึกษาการเกิดเนื้องอกที่ขับเคลื่อนโดยการสูญเสีย WT1 โดยเฉพาะในบริบทของเนื้องอกวิลส์ม์ที่ยังคงมีลักษณะทางพันธุกรรมที่สำคัญอื่นๆ อยู่

เซลล์ Wilms2 ยังมีการกลายพันธุ์ในยีน CTNNB1 ซึ่งเข้ารหัส β-Catenin ซึ่งเป็นองค์ประกอบสำคัญของเส้นทางสัญญาณ Wnt การกลายพันธุ์เหล่านี้ โดยเฉพาะที่ตำแหน่งเซรีน 45 ทำให้ β-Catenin มีเสถียรภาพและสะสมมากขึ้น ส่งผลให้เกิดการกระตุ้นเส้นทาง Wnt อย่างต่อเนื่องการกระตุ้นนี้เป็นตัวกระตุ้นที่รู้จักกันดีของการเพิ่มจำนวนเซลล์และการเกิดเนื้องอกในเนื้องอก Wilms ทำให้ Wilms2 เป็นแบบจำลองที่มีคุณค่าสำหรับการทำความเข้าใจว่าสัญญาณ Wnt ที่ผิดปกติมีส่วนช่วยในการพัฒนาและการลุกลามของเนื้องอกที่มีการกลายพันธุ์ของ WT1 อย่างไร

ในแง่ของฟีโนไทป์ เซลล์ Wilms2 แสดงลักษณะคล้ายเมเซนไคม์ โดยแสดงออกของวีเมนตินและขาดตัวบ่งชี้ของเซลล์เยื่อบุผิว เช่น ไคโตแครทิน ซึ่งสอดคล้องกับลักษณะของเนื้อเยื่อพังผืดในเนื้องอก และเน้นย้ำบทบาทของ WT1 ในการควบคุมการเปลี่ยนผ่านระหว่างเมเซนไคม์และเยื่อบุผิวระหว่างการพัฒนาของไตการวิเคราะห์โปรตีโอมิกส์ของ Wilms2 ได้ระบุการกระตุ้นของตัวรับไทโรซีนไคเนสหลายชนิด (RTKs) รวมถึง PDGFRβ และ AXL ซึ่งเป็นที่ทราบกันดีว่าสนับสนุนการอยู่รอดและการเพิ่มจำนวนของเซลล์มะเร็ง นอกจากนี้ เส้นทางสัญญาณที่อยู่ถัดลงมา เช่น MAPK และ PI3K/AKT ก็ถูกกระตุ้นเช่นกัน ซึ่งยิ่งส่งเสริมคุณสมบัติที่เป็นมะเร็งของเซลล์ Wilms2 มากขึ้น

โดยรวมแล้ว สายเซลล์ Wilms2 ทำหน้าที่เป็นเครื่องมือสำคัญในการสำรวจกลไกโมเลกุลของเนื้องอก Wilms ที่เกิดจากการสูญเสีย WT1 และการส่งสัญญาณ Wnt ที่ผิดปกติ ลักษณะทางพันธุกรรมและฟีโนไทป์ของมันให้แพลตฟอร์มที่แข็งแกร่งสำหรับการสืบสวนเป้าหมายการรักษาที่เป็นไปได้และเพื่อทำความเข้าใจบทบาทของเส้นทางการส่งสัญญาณที่สำคัญในพยาธิสภาพของเนื้องอก Wilms ที่มีองค์ประกอบของเนื้อเยื่อเกี่ยวพัน

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.