Wilms2

Wilms2 šūnu līnija tika iegūta no primārā Wilms audzēja pediatriska pacienta ar WT1 dzimumlīniju mutāciju. Šai šūnu līnijai ir raksturīga homozigotiska nonsensa mutācija WT1 gēnā (c.1084 C>T, p.R362X), kuras rezultātā veidojas saīsināts, nefunkcionāls WT1 proteīns. Funkcionālā WT1, kas ir nieru attīstībai būtisks gēns, zudums ir raksturīga dažu Vilmsa audzēja apakštipu, jo īpaši to, kas saistīti ar mezenhīmu vai stromālo diferenciāciju, pazīme. Wilms2 šūnu līnija ir nozīmīgs modelis, lai pētītu WT1 zuduma izraisītos audzēja veidošanas procesus, jo īpaši saistībā ar Wilms audzējiem, kas saglabā citas kritiskas ģenētiskās iezīmes.

Wilms2 šūnās ir arī mutācijas CTNNB1 gēnā, kas kodē β-Catenin, galveno Wnt signalizācijas ceļa sastāvdaļu. Šīs mutācijas, kas īpaši ietekmē 45. serīnu, izraisa β-Catenin stabilizāciju un uzkrāšanos, kā rezultātā konstitīvi aktivizējas Wnt ceļš. Ir zināms, ka šī aktivizācija ir Vilmsa audzēja šūnu proliferācijas un audzēja rašanās virzītājspēks, tāpēc Wilms2 ir vērtīgs modelis, lai saprastu, kā aberantā Wnt signalizācija veicina audzēju ar WT1 mutācijām attīstību un progresēšanu.

Pēc fenotipa Wilms2 šūnām ir mezenhīmiska morfoloģija, tās ekspresē vimentīnu un tām trūkst epitēlija marķieru, piemēram, citokeratīna. Tas atbilst audzēja stromas īpašībām un uzsver WT1 lomu mezenhīma-epitēlija pāreju regulēšanā nieru attīstības laikā. Wilms2 proteomikas analīzēs ir konstatēta vairāku receptoru tirozīna kināžu (RTK), tostarp PDGFRβ un AXL, aktivācija, kas, kā zināms, veicina audzēja šūnu izdzīvošanu un proliferāciju. Turklāt tiek aktivizēti arī tādi pakārtotie ceļi kā MAPK un PI3K/AKT, kas vēl vairāk veicina Wilms2 šūnu ļaundabīgās īpašības.

Kopumā Wilms2 šūnu līnija kalpo kā būtisks rīks, lai izpētītu molekulāros mehānismus Wilms audzējiem, ko izraisa WT1 zudums un aberatīva Wnt signalizācija. Tās ģenētiskās un fenotipiskās īpašības nodrošina stabilu platformu potenciālo terapeitisko mērķu izpētei un izpratnei par galveno signālu ceļu lomu Vilmsa audzēju ar mezenhimālo komponentu patoloģijā.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu