Wilms2

Wilms2-cellelinjen ble avledet fra en primær Wilms-svulst hos en pediatrisk pasient med en germinal WT1-mutasjon. Denne cellelinjen er karakterisert av en homozygot nonsensmutasjon i WT1-genet (c.1084 C>T, p.R362X), noe som resulterer i produksjon av et avkortet, ikke-funksjonelt WT1-protein. Tap av funksjonelt WT1, et gen som er essensielt for nyreutvikling, er et kjennetegn ved visse undertyper av Wilms-svulster, særlig de som er assosiert med mesenkymal eller stromal differensiering. Wilms2-cellelinjen er en viktig modell for å studere de tumorgenetiske prosessene som drives av WT1-tap, spesielt i sammenheng med Wilms-svulster som beholder andre kritiske genetiske trekk.

Wilms2-celler bærer også mutasjoner i CTNNB1-genet, som koder for β-Catenin, en nøkkelkomponent i Wnt-signalveien. Disse mutasjonene, som spesifikt påvirker serin 45, fører til stabilisering og akkumulering av β-Catenin, noe som resulterer i en konstitutiv aktivering av Wnt-signalveien. Denne aktiveringen er en kjent drivkraft for celleproliferasjon og tumorutvikling i Wilms-svulster, noe som gjør Wilms2 til en verdifull modell for å forstå hvordan avvikende Wnt-signalering bidrar til utvikling og progresjon av svulster med WT1-mutasjoner.

Når det gjelder fenotype, har Wilms2-celler en mesenkymlignende morfologi, som uttrykker vimentin og mangler epitelmarkører som cytokeratin. Dette stemmer overens med svulstens stromale egenskaper og understreker WT1s rolle i reguleringen av mesenkym-epitelovergangen under nyreutviklingen. Proteomanalyser av Wilms2 har identifisert aktivering av flere reseptortyrosinkinaser (RTK-er), inkludert PDGFRβ og AXL, som er kjent for å bidra til overlevelse og spredning av tumorceller. I tillegg aktiveres også nedstrøms signalveier som MAPK og PI3K/AKT, noe som bidrar ytterligere til Wilms2-cellenes ondartede egenskaper.

Wilms2-cellelinjen er et viktig verktøy for å utforske de molekylære mekanismene bak Wilms-svulster som skyldes tap av WT1 og avvikende Wnt-signalering. Cellelinjens genetiske og fenotypiske egenskaper gir en robust plattform for å undersøke potensielle terapeutiske mål og for å forstå hvilken rolle viktige signalveier spiller i patologien til Wilms-svulster med en mesenkymal komponent.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring