Wilms6

Wilms6-cellelinjen ble etablert fra en primær Wilms-svulst hos en pediatrisk pasient med en germinal WT1-mutasjon. Denne cellelinjen er definert av en homozygot nonsensmutasjon i WT1-genet (c.1168 C>T, p.R390X), noe som resulterer i et avkortet og ikke-funksjonelt WT1-protein. WT1 er en kritisk regulator av nyreutviklingen, og tap av dette proteinet er sterkt assosiert med Wilms-svulst, særlig i tilfeller som viser mesenkymal differensiering. Wilms6-cellelinjen er en viktig modell for å studere de tumorogene effektene av fullstendig tap av WT1, særlig i forbindelse med svulster som har både epiteliale og mesenkymale egenskaper.

Wilms6-celler bærer også en mutasjon i CTNNB1-genet, som spesifikt påvirker serin 45 (p.S45F), et sentralt sted for fosforylering som regulerer nedbrytningen av β-Catenin. Denne mutasjonen fører til stabilisering og kjerneakkumulering av β-Catenin, noe som resulterer i en konstitutiv aktivering av Wnt-signalveien. Avvikende aktivering av Wnt-signalering er en kjent drivkraft for celleproliferasjon og tumorigenese i Wilms-svulster, noe som gjør Wilms6 til et verdifullt verktøy for å undersøke hvilken rolle dysregulering av Wnt-signalveien spiller i svulster med WT1-mutasjoner.

Fenotypisk sett har Wilms6-celler en mesenkymal morfologi, med sterkt uttrykk av vimentin og fravær av epitelmarkører som cytokeratin, noe som gjenspeiler den opprinnelige svulstens stromale natur. Disse cellene har vist seg å ha et begrenset, men bemerkelsesverdig differensieringspotensial, inkludert evnen til å differensiere til muskellignende celler under spesifikke forhold, noe som gjenspeiler den mesenkymale differensieringen som er observert i noen Wilms-svulster. Proteomstudier av Wilms6 har identifisert aktivering av flere reseptortyrosinkinaser (RTK-er), inkludert PDGFRβ og AXL, som er involvert i å fremme celleoverlevelse, proliferasjon og migrasjon. Nedstrøms aktivering av signalveier som MAPK og PI3K/AKT understreker ytterligere denne cellelinjens aggressive natur.

Wilms6-cellelinjen er en viktig modell for å utforske de molekylære mekanismene som ligger til grunn for utviklingen av Wilms-svulster, særlig i tilfeller med fullstendig tap av WT1 kombinert med aktivering av Wnt-signalering. Cellelinjens genetiske og fenotypiske egenskaper gjør den til en utmerket plattform for å studere samspillet mellom WT1-mangel og avvikende signalveier, noe som gir innsikt i potensielle terapeutiske mål for denne aggressive tumortypen.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring