Wilms6

Wilms6 rakuliin loodi Wilmsi primaarsest kasvajast pediaatrilisel patsiendil, kellel oli WT1 mutatsioon. See rakuliin on määratletud homosügootse nonsense-mutatsiooniga WT1 geenis (c.1168 C>T, p.R390X), mille tulemuseks on kärbitud ja mittefunktsionaalne WT1 valk. WT1 on neerude arengu kriitiline regulaator ja selle kadumine on tugevalt seotud Wilmsi kasvajaga, eriti juhul, kui esineb mesenhüümiline diferentseerumine. Wilms6 rakuliin on oluline mudel WT1 täieliku kadumise tumorigeensete mõjude uurimiseks, eriti selliste kasvajate puhul, millel on nii epiteliaalsed kui ka mesenhüümilised omadused.

Wilms6 rakud kannavad ka mutatsiooni CTNNB1 geenis, mis mõjutab konkreetselt seriini 45 (p.S45F), mis on β-kateniini lagunemist reguleeriva fosforüleerimise võtmekoht. See mutatsioon viib β-kateniini stabiliseerumiseni ja tuuma akumuleerumiseni, mille tulemuseks on Wnt-signaaltee konstitutiivne aktiveerimine. Wnt-signalisatsiooni kõrvalekalduv aktiveerimine on teadaolevalt Wilmsi kasvajate rakkude proliferatsiooni ja kasvajate tekke ajendiks, mistõttu Wilms6 on väärtuslik vahend WT1-mutatsiooniga kasvajate Wnt-tee düsregulatsiooni rolli uurimiseks.

Fenotüübiliselt on Wilms6 rakud mesenhüümilise morfoloogiaga, vimentiini tugeva ekspressiooniga ja epiteeli markerite, nagu tsütokeratiini, puudumisega, mis peegeldab algse kasvaja stromaalset olemust. On näidatud, et neil rakkudel on piiratud, kuid märkimisväärne diferentseerumispotentsiaal, sealhulgas võime diferentseeruda eritingimustes lihasarnasteks rakkudeks, mis peegeldab mõnes Wilmsi kasvajas täheldatud mesenhüümset diferentseerumist. Wilmsi6 proteoomilised uuringud on tuvastanud mitmete retseptori türosiini kinaaside (RTK), sealhulgas PDGFRβ ja AXL aktiveerimise, mis on seotud rakkude ellujäämise, proliferatsiooni ja migratsiooni edendamisega. Selliste signaaliradade nagu MAPK ja PI3K/AKT allavoolu aktiveerimine rõhutab veelgi selle rakuliini agressiivsust.

Üldiselt on Wilms6 rakuliin oluline mudel Wilmsi kasvajate arengu aluseks olevate molekulaarsete mehhanismide uurimiseks, eriti juhul, kui WT1 on täielikult kadunud koos Wnt-signaalide aktiveerimisega. Selle geneetilised ja fenotüüpilised omadused teevad sellest suurepärase platvormi WT1 puuduse ja kõrvalekalduvate signaaliradade vahelise koostoime uurimiseks, mis annab ülevaate selle agressiivse kasvajatüübi potentsiaalsetest terapeutilistest sihtmärkidest.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest