Wilms6

Wilms6 šūnu līnija tika izveidota no primārā Wilms audzēja pediatriska pacienta ar WT1 mutāciju. Šai šūnu līnijai ir homozigotiska nonsensa mutācija WT1 gēnā (c.1168 C>T, p.R390X), kas izraisa saīsinātu un nefunkcionālu WT1 proteīnu. WT1 ir kritiski svarīgs nieru attīstības regulators, un tā zudums ir cieši saistīts ar Vilmsa audzēju, jo īpaši gadījumos, kad vēzis ir mezenhimatiski diferencēts. Wilms6 šūnu līnija ir svarīgs modelis, lai pētītu pilnīgas WT1 zaudēšanas ietekmi uz audzēju, jo īpaši saistībā ar audzējiem, kam piemīt gan epitēlija, gan mezenhīma īpašības.

Wilms6 šūnām ir arī mutācija CTNNB1 gēnā, kas īpaši ietekmē 45. serīnu (p.S45F) - galveno fosforilēšanas vietu, kas regulē β-Catenin degradāciju. Šī mutācija izraisa β-Catenin stabilizāciju un kodolu akumulāciju, kā rezultātā konstitīvi aktivizējas Wnt signalizācijas ceļš. Zināms, ka Wnt signalizācijas aberantā aktivizācija ir Vilmsa audzēju šūnu proliferācijas un audzēja rašanās virzītājspēks, tāpēc Wilms6 ir vērtīgs instruments, lai pētītu Wnt ceļa disregulācijas lomu audzējos ar WT1 mutācijām.

Fenotipiski Wilms6 šūnām ir mezenhimāla morfoloģija ar spēcīgu vimentīna ekspresiju un tādu epitēlija marķieru kā citokeratīna trūkumu, kas atspoguļo sākotnējā audzēja stromālo raksturu. Šīm šūnām piemīt ierobežots, bet ievērojams diferenciācijas potenciāls, tostarp spēja īpašos apstākļos diferencēties par muskuļiem līdzīgām šūnām, kas atspoguļo mezenhimālo diferenciāciju, kas novērota dažos Vilmsa audzējos. Vilmsa audzēju proteomikas pētījumos6 ir konstatēta vairāku receptoru tirozīna kināžu (RTK), tostarp PDGFRβ un AXL, aktivācija, kas veicina šūnu izdzīvošanu, proliferāciju un migrāciju. Pakārtotā signalizācijas ceļu, piemēram, MAPK un PI3K/AKT, aktivizācija vēl vairāk uzsver šīs šūnu līnijas agresīvo raksturu.

Kopumā Wilms6 šūnu līnija kalpo kā būtisks modelis, lai pētītu molekulāros mehānismus, kas ir Vilmsa audzēja attīstības pamatā, jo īpaši gadījumos, kad ir pilnīgs WT1 zudums apvienojumā ar Wnt signālu aktivizāciju. Tās ģenētiskās un fenotipiskās īpašības padara to par lielisku platformu, lai pētītu mijiedarbību starp WT1 deficītu un aberantiem signālu ceļiem, sniedzot ieskatu potenciālajos terapeitiskajos mērķos šī agresīvā audzēja tipa ārstēšanā.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu