Wilms6

Buněčná linie Wilms6 byla vytvořena z primárního Wilmsova nádoru u dětského pacienta se zárodečnou mutací WT1. Tato buněčná linie je definována homozygotní nonsense mutací v genu WT1 (c.1168 C>T, p.R390X), která vede ke zkrácení a nefunkčnosti proteinu WT1. WT1 je kritickým regulátorem vývoje ledvin a jeho ztráta je silně spojena s Wilmsovým nádorem, zejména v případech vykazujících mezenchymální diferenciaci. Buněčná linie Wilms6 je důležitým modelem pro studium tumorigenních účinků úplné ztráty WT1, zejména v kontextu nádorů, které vykazují jak epiteliální, tak mezenchymální charakteristiky.

Buňky Wilms6 nesou také mutaci v genu CTNNB1, která konkrétně postihuje serin 45 (p.S45F), klíčové místo pro fosforylaci, která reguluje degradaci β-kateninu. Tato mutace vede ke stabilizaci a jaderné akumulaci β-Cateninu, což vede ke konstitutivní aktivaci signální dráhy Wnt. Aberantní aktivace signalizace Wnt je známým faktorem buněčné proliferace a tumorigeneze u Wilmsových nádorů, což z Wilms6 činí cenný nástroj pro zkoumání role dysregulace dráhy Wnt u nádorů s mutací WT1.

Fenotypicky vykazují buňky Wilms6 mezenchymální morfologii se silnou expresí vimentinu a absencí epiteliálních markerů, jako je cytokeratin, což odráží stromální povahu původního nádoru. Bylo prokázáno, že tyto buňky mají omezený, ale pozoruhodný diferenciační potenciál, včetně schopnosti diferencovat se za specifických podmínek na buňky podobné svalům, což odráží mezenchymální diferenciaci pozorovanou u některých Wilmsových nádorů. Proteomické studie Wilmsových nádorů6 identifikovaly aktivaci několika receptorových tyrozinkináz (RTK), včetně PDGFRβ a AXL, které se podílejí na podpoře přežívání, proliferace a migrace buněk. Následná aktivace signálních drah, jako jsou MAPK a PI3K/AKT, dále podtrhuje agresivní povahu této buněčné linie.

Celkově lze říci, že buněčná linie Wilms6 slouží jako klíčový model pro zkoumání molekulárních mechanismů, které jsou základem vzniku Wilmsova nádoru, zejména v případech úplné ztráty WT1 v kombinaci s aktivací signalizace Wnt. Díky svým genetickým a fenotypovým vlastnostem je vynikající platformou pro studium vzájemného působení mezi nedostatkem WT1 a aberantními signálními drahami, což poskytuje poznatky o potenciálních terapeutických cílech pro tento agresivní typ nádoru.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení