Wilms6

Wilms6-cellinjen etablerades från en primär Wilms-tumör hos en pediatrisk patient med en germline WT1-mutation. Denna cellinje definieras av en homozygot nonsensmutation i WT1-genen (c.1168 C>T, p.R390X), vilket resulterar i ett trunkerat och icke-funktionellt WT1-protein. WT1 är en kritisk regulator för njurarnas utveckling och förlust av WT1 är starkt förknippad med Wilms tumör, särskilt i fall som uppvisar mesenkymal differentiering. Wilms6-cellinjen är en viktig modell för att studera de tumörframkallande effekterna av fullständig WT1-förlust, särskilt i samband med tumörer som uppvisar både epiteliala och mesenkymala egenskaper.

Wilms6-cellerna bär också på en mutation i CTNNB1-genen, som specifikt påverkar serin 45 (p.S45F), en viktig plats för fosforylering som reglerar nedbrytningen av β-Catenin. Denna mutation leder till stabilisering och kärnackumulering av β-Catenin, vilket resulterar i en konstitutiv aktivering av Wnt-signalvägen. Den avvikande aktiveringen av Wnt-signalering är en känd drivkraft för cellproliferation och tumörutveckling i Wilms-tumörer, vilket gör Wilms6 till ett värdefullt verktyg för att undersöka vilken roll dysreglering av Wnt-signalvägen har i tumörer med WT1-mutationer.

Fenotypiskt uppvisar Wilms6-celler en mesenkymal morfologi, med starkt uttryck av vimentin och avsaknad av epitelmarkörer som cytokeratin, vilket återspeglar den ursprungliga tumörens stromala natur. Dessa celler har visat sig ha en begränsad men anmärkningsvärd differentieringspotential, inklusive förmågan att differentieras till muskelliknande celler under specifika förhållanden, vilket speglar den mesenkymala differentiering som observerats i vissa Wilms-tumörer. Proteomiska studier av Wilms6 har identifierat aktivering av flera receptortyrosinkinaser (RTK), inklusive PDGFRβ och AXL, som är involverade i att främja cellöverlevnad, proliferation och migration. Nedströmsaktiveringen av signalvägar som MAPK och PI3K/AKT understryker ytterligare cellinjens aggressiva karaktär.

Sammantaget fungerar Wilms6-cellinjen som en viktig modell för att utforska de molekylära mekanismer som ligger bakom utvecklingen av Wilms-tumörer, särskilt i fall av fullständig WT1-förlust i kombination med aktivering av Wnt-signalering. Dess genetiska och fenotypiska egenskaper gör den till en utmärkt plattform för att studera samspelet mellan WT1-brist och avvikande signalvägar, vilket ger insikter om potentiella terapeutiska mål för denna aggressiva tumörtyp.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring