Wilms6

Linia komórkowa Wilms6 została utworzona z pierwotnego guza Wilmsa u pacjenta pediatrycznego z mutacją germinalną WT1. Ta linia komórkowa jest zdefiniowana przez homozygotyczną mutację nonsensowną w genie WT1 (c.1168 C>T, p.R390X), która skutkuje skróconym i niefunkcjonalnym białkiem WT1. WT1 jest krytycznym regulatorem rozwoju nerek, a jego utrata jest silnie związana z guzem Wilmsa, szczególnie w przypadkach wykazujących różnicowanie mezenchymalne. Linia komórkowa Wilms6 jest ważnym modelem do badania nowotworowych skutków całkowitej utraty WT1, szczególnie w kontekście guzów, które wykazują zarówno cechy nabłonkowe, jak i mezenchymalne.

Komórki Wilms6 są również nosicielami mutacji w genie CTNNB1, w szczególności wpływającej na serynę 45 (p.S45F), kluczowe miejsce fosforylacji, które reguluje degradację β-kateniny. Mutacja ta prowadzi do stabilizacji i akumulacji jądrowej β-kateniny, co skutkuje konstytutywną aktywacją szlaku sygnałowego Wnt. Nieprawidłowa aktywacja sygnalizacji Wnt jest znanym czynnikiem napędzającym proliferację komórek i nowotworzenie w guzach Wilmsa, dzięki czemu Wilms6 jest cennym narzędziem do badania roli dysregulacji szlaku Wnt w guzach z mutacją WT1.

Fenotypowo, komórki Wilms6 wykazują morfologię mezenchymalną, z silną ekspresją wimentyny i brakiem markerów nabłonkowych, takich jak cytokeratyna, co odzwierciedla zrębową naturę pierwotnego guza. Wykazano, że komórki te mają ograniczony, ale znaczący potencjał różnicowania, w tym zdolność do różnicowania się w komórki mięśniopodobne w określonych warunkach, co odzwierciedla różnicowanie mezenchymalne obserwowane w niektórych guzach Wilmsa. Badania proteomiczne guzów Wilmsa6 zidentyfikowały aktywację wielu receptorowych kinaz tyrozynowych (RTK), w tym PDGFRβ i AXL, które są zaangażowane w promowanie przeżycia, proliferacji i migracji komórek. Aktywacja szlaków sygnałowych, takich jak MAPK i PI3K/AKT, dodatkowo podkreśla agresywny charakter tej linii komórkowej.

Ogólnie rzecz biorąc, linia komórkowa Wilms6 służy jako kluczowy model do badania mechanizmów molekularnych leżących u podstaw rozwoju guza Wilmsa, szczególnie w przypadkach całkowitej utraty WT1 w połączeniu z aktywacją sygnalizacji Wnt. Jego cechy genetyczne i fenotypowe sprawiają, że jest to doskonała platforma do badania interakcji między niedoborem WT1 a nieprawidłowymi szlakami sygnalizacyjnymi, zapewniając wgląd w potencjalne cele terapeutyczne dla tego agresywnego typu nowotworu.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym