Wilms6

A linha celular Wilms6 foi estabelecida a partir de um tumor primário de Wilms num doente pediátrico com uma mutação WT1 na linha germinal. Esta linha celular é definida por uma mutação homozigótica sem sentido no gene WT1 (c.1168 C>T, p.R390X), que resulta numa proteína WT1 truncada e não funcional. A WT1 é um regulador crítico do desenvolvimento renal e a sua perda está fortemente associada ao tumor de Wilms, particularmente nos casos que apresentam diferenciação mesenquimal. A linha celular Wilms6 é um modelo importante para estudar os efeitos tumorigénicos da perda completa de WT1, particularmente no contexto de tumores que exibem caraterísticas epiteliais e mesenquimatosas.

As células Wilms6 também apresentam uma mutação no gene CTNNB1, que afecta especificamente a serina 45 (p.S45F), um local chave para a fosforilação que regula a degradação da β-Catenina. Esta mutação leva à estabilização e acumulação nuclear da β-Catenina, resultando na ativação constitutiva da via de sinalização Wnt. A ativação aberrante da sinalização Wnt é um fator conhecido de proliferação celular e tumorigénese nos tumores de Wilms, o que faz do Wilms6 uma ferramenta valiosa para investigar o papel da desregulação da via Wnt em tumores com mutações WT1.

Fenotipicamente, as células Wilms6 apresentam uma morfologia mesenquimal, com forte expressão de vimentina e ausência de marcadores epiteliais como a citoqueratina, reflectindo a natureza estromal do tumor original. Foi demonstrado que estas células possuem um potencial de diferenciação limitado, mas notável, incluindo a capacidade de se diferenciarem em células do tipo muscular em condições específicas, o que reflecte a diferenciação mesenquimal observada em alguns tumores de Wilms. Os estudos proteómicos do tumor de Wilms6 identificaram a ativação de múltiplos receptores tirosina-quinases (RTKs), incluindo o PDGFRβ e o AXL, que estão envolvidos na promoção da sobrevivência, proliferação e migração celulares. A ativação a jusante das vias de sinalização, como a MAPK e a PI3K/AKT, reforça ainda mais a natureza agressiva desta linha celular.

De um modo geral, a linha celular Wilms6 constitui um modelo crucial para explorar os mecanismos moleculares subjacentes ao desenvolvimento do tumor de Wilms, particularmente nos casos de perda completa de WT1 combinada com a ativação da sinalização Wnt. As suas caraterísticas genéticas e fenotípicas tornam-na uma excelente plataforma para o estudo da interação entre a deficiência de WT1 e as vias de sinalização aberrantes, fornecendo informações sobre potenciais alvos terapêuticos para este tipo de tumor agressivo.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia