Wilms6

Wilms6-solulinja perustettiin primaarisesta Wilmsin kasvaimesta, joka oli peräisin lapsipotilaalta, jolla oli itulinjan WT1-mutaatio. Tämä solulinja on määritelty homotsygoottisen nonsense-mutaation perusteella WT1-geenissä (c.1168 C>T, p.R390X), joka johtaa typistettyyn ja toimimattomaan WT1-proteiiniin. WT1 on kriittinen munuaisten kehityksen säätelijä, ja sen häviäminen liittyy vahvasti Wilmsin kasvaimeen, erityisesti tapauksissa, joissa esiintyy mesenkymaalista erilaistumista. Wilms6-solulinja on tärkeä malli täydellisen WT1:n menetyksen kasvainvaikutusvaikutusten tutkimiseen erityisesti sellaisten kasvainten yhteydessä, joilla on sekä epiteeli- että mesenkymaalisia piirteitä.

Wilms6-soluissa on myös mutaatio CTNNB1-geenissä, joka vaikuttaa erityisesti seriini 45:een (p.S45F), joka on keskeinen fosforylaatiokohta, joka säätelee β-kateniinin hajoamista. Tämä mutaatio johtaa β-kateniinin stabiloitumiseen ja ydinkertymään, mikä johtaa Wnt-signalointireitin konstitutiiviseen aktivoitumiseen. Wnt-signalisaation poikkeava aktivoituminen on tunnetusti solujen lisääntymisen ja kasvainten synnyn ajuri Wilmsin kasvaimissa, joten Wilms6 on arvokas väline WT1-mutaatioita sisältävissä kasvaimissa tapahtuvan Wnt-reitin säätelyhäiriön roolin tutkimiseen.

Fenotyypiltään Wilms6-solut ovat mesenkymaalisen morfologian omaavia, ja niissä ilmentyy voimakkaasti vimentiini, mutta epiteelin merkkiaineita, kuten sytokeratiinia, ei esiinny, mikä kuvastaa alkuperäisen kasvaimen stroomaalista luonnetta. Näillä soluilla on osoitettu olevan rajallinen mutta huomattava erilaistumispotentiaali, mukaan lukien kyky erilaistua lihaksen kaltaisiksi soluiksi tietyissä olosuhteissa, mikä heijastaa joissakin Wilmsin kasvaimissa havaittua mesenkymaalista erilaistumista. Wilmsin6 proteomitutkimuksissa on tunnistettu useiden reseptorityrosiinikinaasien (RTK), kuten PDGFRβ:n ja AXL:n, aktivoituminen, ja ne osallistuvat solujen eloonjäämisen, proliferaation ja migraation edistämiseen. MAPK:n ja PI3K/AKT:n kaltaisten signaalireittien aktivoituminen edelleen korostaa tämän solulinjan aggressiivista luonnetta.

Kaiken kaikkiaan Wilms6-solulinja toimii ratkaisevana mallina Wilmsin kasvainten kehittymisen taustalla olevien molekyylimekanismien tutkimisessa, erityisesti tapauksissa, joissa WT1:n täydellinen menetys yhdistettynä Wnt-signaalin aktivoitumiseen. Sen geneettiset ja fenotyyppiset ominaisuudet tekevät siitä erinomaisen alustan WT1:n puutteen ja poikkeavien signaalireittien välisen vuorovaikutuksen tutkimiseen, mikä antaa tietoa tämän aggressiivisen kasvaintyypin mahdollisista hoitokohteista.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa