Wilms10T

Wilms10T-solulinja on peräisin Wilmsin kasvaimen primaarinäytteestä, joka on saatu potilaalta, jolla on Wilmsin kasvain, pediatrinen nefroblastooma. Tälle solulinjalle on ominaista WT1-geenin homotsygoottinen deleetio, joka johtaa WT1:n toiminnan täydelliseen katoamiseen. WT1 on kriittinen geeni, joka osallistuu munuaisten kehitykseen ja munuaisten normaalin erilaistumisen ylläpitämiseen. Toisin kuin monissa muissa Wilmsin kasvainsolulinjoissa, Wilms10T:stä puuttuu WT1-proteiinin ilmentyminen, mikä kuvastaa tässä kasvaimen alatyypissä esiintyviä vakavia geneettisiä muutoksia. Lisäksi Wilms10T-solulinjassa esiintyy heterotsygotian menetystä (LOH) kromosomialueella 11p15, joka sisältää tärkeitä geenejä, kuten IGF2, mikä osaltaan lisää sen kasvainogeenisia ominaisuuksia.

Wilms10T-soluilla on vakaa normaali karyotyyppi, jossa ei ole merkittäviä kromosomien uudelleenjärjestelyjä lukuun ottamatta WT1-alueen spesifistä deletoitumista. Tätä solulinjaa on käytetty laajasti tutkimaan täydellisen WT1:n menetyksen vaikutuksia kasvaimen biologiaan, mukaan lukien sen vaikutus solujen proliferaatioon, erilaistumiseen ja vasteeseen erilaisille signaalireiteille. Solut säilyttävät mesenkymaaliset piirteet ja ilmentävät merkkiaineita, kuten vimentiiniä, mutta niistä puuttuvat epiteelimerkkiaineet, kuten sytokeratiini, mikä viittaa niiden stroomaperäisyyteen.

Merkittävässä tutkimuksessa on keskitytty Wilms10T-solujen aktiivisiin signaalireitteihin. Proteomitutkimukset ovat osoittaneet, että näissä soluissa aktivoituu useita reseptorityrosiinikinaaseja (RTK), kuten IGF1R, PDGFRβ ja AXL, joiden tiedetään ohjaavan kasvainten syntyä. Lisäksi Wilms10T-soluissa aktivoituvat myöhemmät signaalireitit, kuten MAPK- ja PI3K/AKT-reitit, jotka vaikuttavat niiden aggressiiviseen kasvainfenotyyppiin. Wilms10T:n kattava karakterisointi tekee siitä arvokkaan mallin, jonka avulla voidaan tutkia Wilmsin kasvaimen molekulaarisia taustatekijöitä, kun WT1 menetetään kokonaan, sekä tutkia mahdollisia terapeuttisia kohteita tässä aggressiivisessa kasvaimen alatyypissä.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa