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Wilms10T
Tissue
腎臟
Disease
威爾姆斯腫瘤
Synonyms
Wilms10

Documents

Wilms10T

Cell line · Product number 300417

The Wilms10T cell line was derived from a primary Wilms tumor sample obtained from a patient with Wilms tumor, a pediatric nephroblastoma. This cell line ...

US$800.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

Wilms10T 細胞系源自一名威爾姆斯腫瘤(一種兒童腎母細胞瘤)患者所提供的原發性威爾姆斯腫瘤樣本。 該細胞系的特徵為 WT1 基因的純合性缺失,導致 WT1 功能完全喪失;WT1 是一種參與腎臟發育及維持正常腎臟分化之關鍵基因。 與許多其他威爾姆斯腫瘤細胞系不同,Wilms10T 完全缺乏 WT1 蛋白質的表達,這反映了此腫瘤亞型中存在的嚴重基因變異。 此外,Wilms10T 細胞系在 11p15 染色體區域呈現雜合性缺失(LOH),該區域包含 IGF2 等重要基因,進一步強化了其致瘤特性。

Wilms10T 細胞具有穩定的正常核型,除 WT1 區域的特定缺失外,並無重大染色體重排。此細胞系已被廣泛用於研究完全喪失 WT1 對腫瘤生物學的影響,包括其對細胞增殖、分化以及對各種訊號傳導路徑反應的影響。 這些細胞保留了間質特性,表達如維曼汀(vimentin)等標記物,同時缺乏細胞角蛋白(cytokeratin)等上皮標記物,這表明其源自間質。

大量研究聚焦於 Wilms10T 細胞中活躍的訊號傳導路徑。蛋白質體學研究顯示,這些細胞中有多種受體酪胺酸激酶(RTKs)呈現活化狀態,例如 IGF1R、PDGFRβ 及 AXL,這些因子皆已知會驅動腫瘤發生。 此外,Wilms10T 細胞中的下游訊號傳導路徑(包括 MAPK 和 PI3K/AKT 路徑)亦被活化,這有助於形成其侵襲性腫瘤表型。 對 Wilms10T 細胞的全面特徵分析,使其成為研究完全喪失 WT1 的威爾姆斯腫瘤分子基礎,以及探索此侵襲性腫瘤亞型潛在治療標靶的寶貴模型。

Tissue
腎臟
Disease
威爾姆斯腫瘤
Applications
體外細胞培養模型與生化研究
Synonyms
  • Wilms10

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
紡錘狀
Cell type
威爾姆斯細胞
Doubling time
46 小時

04Identifiers

Citation
Wilms10T(Cytion 型號 300417)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_A5SL

05Expression and susceptibility

Mutational profile
WT1 突變狀態:在 del11p13 範圍內呈 WT1 純合性缺失。LOH:11p13 區域無 LOH,但 11p15 區域呈 UPD。CTNNB1 突變狀態:TCT 純合性缺失,p.DS45,3p 呈 UPD

06Handling and culture

Culture medium
MSCGM 套組(由 Lonza 提供)
Incubation atmosphere

37°C,5% CO₂,加濕環境。

Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
從貼壁細胞中移除舊培養基,並用不含鈣和鎂的PBS洗滌細胞。T25培養瓶使用3-5毫升PBS,T75培養瓶則使用5-10毫升。 接著,用 Accutase 完全覆蓋細胞,T25 培養瓶使用 1–2 毫升,T75 培養瓶則使用 2.5 毫升。將細胞於室溫下孵育 8–10 分鐘,使其脫附。 孵育後,將細胞與 10 毫升培養基輕柔混合以使其重新懸浮,然後以 300xg 離心 3 分鐘。棄去上清液,將細胞重新懸浮於新鮮培養基中,並轉移至已預先加入新鮮培養基的新培養瓶中。
Seeding density
4 × 10⁴ 個細胞/cm²
Fluid renewal
每週 1 至 2 次
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法,排除支原體污染的可能性。

為確保無細菌、真菌或酵母菌污染,每日均會對細胞培養物進行目視檢查。

Freeze medium
作為冷凍保存培養基,我們使用完全生長培養基(含 FBS)+ 10% DMSO 以確保解凍後的存活率,或使用 CM-1 (Cytion 型號 800100),該培養基含有經優化的滲透保護劑和代謝穩定劑,可提升細胞恢復率並減輕冷凍誘導的壓力。
Storage conditions

若需長期保存,請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前,可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中,作為短期過渡步驟。

Shipping conditions

冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏,並裝於經驗證的隔熱包裝中,包裝內含有足夠的冷媒,以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後,請立即檢查容器,並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。

08Donor

Donor age
2年
Ethnicity
高加索人