Wilms8

Buněčná linie Wilms8 byla odvozena z primárního Wilmsova nádoru u dětského pacienta se zárodečnou mutací WT1. Tato buněčná linie je charakterizována homozygotní nonsense mutací v genu WT1 (c.1168 C>T, p.R390X), která vede k úplné ztrátě funkce WT1. WT1 je klíčový pro normální vývoj ledvin a jeho inaktivace je běžným rysem u některých agresivních podtypů Wilmsova nádoru, zejména těch, které vykazují mezenchymální diferenciaci. Wilms8 proto představuje cenný model pro studium vlivu ztráty WT1 na tumorigenezi, zejména v kontextu Wilmsových nádorů, které vznikají s výraznou stromální složkou.

Kromě mutace WT1 nesou buňky Wilms8 mutaci v genu CTNNB1 (p.S45A), který kóduje β-katenin, klíčový regulátor signální dráhy Wnt. Mutace na serinu 45 narušuje normální proces fosforylace, který vede k degradaci β-Cateninu, a způsobuje jeho stabilizaci a akumulaci v jádře. To má za následek konstitutivní aktivaci signalizace Wnt, která pohání buněčnou proliferaci a přispívá k onkogenním vlastnostem buněčné linie Wilms8. Vzájemné působení mezi ztrátou WT1 a aberantní signalizací Wnt u Wilms8 z ní činí klíčový model pro pochopení molekulárních mechanismů, které jsou základem těchto drah v biologii nádorů Wilms.

Buňky Wilms8 vykazují mezenchymální fenotyp charakterizovaný expresí vimentinu a absencí epiteliálních markerů, jako je cytokeratin. To odpovídá stromální diferenciaci pozorované v původním nádoru. Buňky vykazují omezenou schopnost podstoupit další mezenchymální diferenciaci, například za specifických podmínek vytvářet buňky podobné svalům. Proteomické analýzy Wilmsova8 nádoru odhalily aktivaci mnoha receptorových tyrozinkináz (RTK), včetně PDGFRβ a AXL, které se podílejí na klíčových procesech, jako je přežívání, migrace a proliferace buněk. K agresivním vlastnostem buněk Wilms8 dále přispívá aktivace navazujících signálních drah, zejména drah MAPK a PI3K/AKT.

Celkově lze říci, že buněčná linie Wilms8 slouží jako základní nástroj pro zkoumání molekulárního základu Wilmsova nádoru způsobeného ztrátou WT1 a aberantní signalizací Wnt. Její genetické a fenotypové vlastnosti z ní činí robustní platformu pro studium interakce mezi těmito kritickými drahami a pro identifikaci potenciálních terapeutických cílů u Wilmsových nádorů se stromální složkou.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení