Wilms8

La lignée cellulaire Wilms8 a été dérivée d'une tumeur de Wilms primaire chez un patient pédiatrique présentant une mutation germinale du gène WT1. Cette lignée cellulaire est caractérisée par une mutation homozygote non-sens du gène WT1 (c.1168 C>T, p.R390X), entraînant une perte complète de la fonction de WT1. Le gène WT1 est essentiel au développement normal des reins et son inactivation est une caractéristique commune à certains sous-types agressifs de la tumeur de Wilms, en particulier ceux qui présentent une différenciation mésenchymateuse. Wilms8 constitue donc un modèle précieux pour étudier les effets de la perte de WT1 sur la tumorigenèse, en particulier dans le contexte des tumeurs de Wilms qui se développent avec une composante stromale prononcée.

Outre la mutation du gène WT1, les cellules Wilms8 présentent une mutation du gène CTNNB1 (p.S45A), qui code pour la β-Caténine, un régulateur clé de la voie de signalisation Wnt. La mutation à la sérine 45 perturbe le processus normal de phosphorylation qui conduit à la dégradation de la β-Caténine, provoquant sa stabilisation et son accumulation dans le noyau. Il en résulte une activation constitutive de la signalisation Wnt, qui entraîne la prolifération cellulaire et contribue aux propriétés oncogènes de la lignée cellulaire Wilms8. L'interaction entre la perte de WT1 et la signalisation Wnt aberrante dans la lignée Wilms8 en fait un modèle crucial pour comprendre les mécanismes moléculaires qui sous-tendent ces voies dans la biologie des tumeurs de Wilms.

Les cellules Wilms8 présentent un phénotype mésenchymateux, caractérisé par l'expression de la vimentine et l'absence de marqueurs épithéliaux tels que la cytokératine. Cela correspond à la différenciation stromale observée dans la tumeur d'origine. Les cellules démontrent une capacité limitée à subir une différenciation mésenchymateuse supplémentaire, telle que la formation de cellules musculaires dans des conditions spécifiques. Les analyses protéomiques de Wilms8 ont révélé l'activation de plusieurs récepteurs tyrosine kinases (RTK), dont le PDGFRβ et l'AXL, qui sont impliqués dans des processus clés tels que la survie, la migration et la prolifération des cellules. L'activation des voies de signalisation en aval, en particulier les voies MAPK et PI3K/AKT, contribue également aux caractéristiques agressives des cellules Wilms8.

Dans l'ensemble, la lignée cellulaire Wilms8 est un outil essentiel pour étudier les bases moléculaires de la tumeur de Wilms due à la perte de WT1 et à une signalisation Wnt aberrante. Ses caractéristiques génétiques et phénotypiques en font une plateforme robuste pour l'étude de l'interaction entre ces voies critiques et pour l'identification de cibles thérapeutiques potentielles dans les tumeurs de Wilms à composante stromale.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie