01General information
- Description
Wilms10M 细胞系是从一名 Wilms 肿瘤(肾母细胞瘤)患者的转移性肺结节中建立的。与原发肿瘤 Wilms10T 细胞系一样,Wilms10M 细胞系的特点是 WT1 基因同源缺失,导致 WT1 蛋白完全缺失。WT1 是肾脏正常发育所必需的,其缺失与更具侵袭性的肿瘤行为有关,尤其是在转移情况下。此外,Wilms10M 细胞在包括 IGF2 基因在内的 11p15 染色体区域表现出杂合性缺失(LOH),进一步加剧了这些细胞的恶性特性。
Wilms10M 细胞保持稳定的核型,除了 WT1 区域的特异性缺失外,没有重大的染色体重排。这种细胞系来源于转移组织,对研究驱动 Wilms 肿瘤转移的分子机制特别有价值。这些细胞表现出间充质特征,表达波形蛋白等标志物,但缺乏细胞角蛋白等上皮标志物,这表明它们来自肿瘤的基质成分。
对 Wilms10M 的研究主要集中在这些转移细胞中活跃的信号通路。蛋白质组分析表明,包括 IGF1R、PDGFRβ 和 AXL 在内的多种受体酪氨酸激酶(RTK)被激活,它们参与促进细胞存活、增殖和转移潜能。下游的 MAPK 和 PI3K/AKT 信号通路也被激活,在维持 Wilms10M 细胞的侵袭和转移表型方面发挥着关键作用。鉴于其转移起源,Wilms10M 是了解 Wilms 肿瘤转移的分子事件和开发针对转移性疾病的靶向治疗策略的重要模型。
- Tissue
- 肾脏
- Disease
- Wilms 肿瘤
- Applications
- 体外细胞培养模型。生化研究
- Synonyms
- Wilms10
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Female
- Growth properties
- Adherent
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- 纺锤形
- Cell type
- Wilms 细胞
04Identifiers
- Citation
- Wilms10M(Cytion 目录号 300418)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_A5SL
05Expression and susceptibility
- Mutational profile
- WT1 基因突变情况:在 del11p13 中为同卵 del WT1。LOH:11p13 无,但 11p15 有 UPD。 CTNNB1 突变状态:同基因 del TCT,p.DS45,UPD 3p
06Handling and culture
- Culture medium
- MSCGM 试剂盒(龙沙公司提供)
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, 加湿环境。
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- 去除粘附细胞上的旧培养基,用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS,T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞,T25 烧瓶用 1-2 毫升,T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟,使其分离。孵育后,用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬,然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液,用新鲜培养基重悬细胞,并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。
为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。
- Freeze medium
- 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。
- Storage conditions
如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。
- Shipping conditions
冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。
08Donor
- Donor age
- 2 年
- Ethnicity
- 高加索人
09Legal and safety
- Safety precautions
- 计划将低温样品储存在液氮中以便将来解冻时,必须遵守严格的安全措施。在将冷冻样本移入或移出液氮罐时,必须穿戴适当的防护手套和防护服,并使用面罩或安全护目镜。这样做是为了降低在移出时因冷冻样品爆炸而造成伤害的风险,因为爆炸可能导致锋利的碎片飞溅。
- Warranty
在Cytion,我们保证产品的质量和活力。 我们保证,从我们的工厂发货后 60 天内,我们的细胞在开始培养时都是存活的。 我们保证所有材料均符合分析证书和/或产品说明书中描述的规格。
有关详细信息,请参阅我们的 <a href="" /Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">保修声明 。
- Material Transfer Agreement required
- Yes
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