U-CH1

A linhagem celular U-CH1 é o primeiro modelo celular humano permanente de cordoma já estabelecido, derivado de um cordoma sacral recorrente. Os cordomas são tumores raros, de crescimento lento e localmente invasivos, que se originam de remanescentes da notocorda e ocorrem principalmente ao longo do esqueleto axial. A U-CH1 apresenta características citogenéticas típicas do cordoma, incluindo aberrações cromossômicas clonais, como der(1)t(1;22), deleções nos cromossomos 4, 5, 6, 9, 10 e 20, e um cromossomo derivado 20 resultante de t(10;20). A hibridização genômica comparativa revelou alterações recorrentes no número de cópias de DNA nos cordomas, particularmente perdas em 1p e 3p e ganhos em 7q, 5q, 12q e 20. O perfil citogenético da U-CH1 reflete de perto o de seu tumor parental, reforçando sua relevância biológica.

Do ponto de vista funcional e molecular, o U-CH1 e outras linhagens celulares de cordoma apresentam características marcantes do cordoma, incluindo a expressão de brachyury, um fator de transcrição considerado um marcador diagnóstico fundamental. A U-CH1 também apresenta deleções do CDKN2A e não exprime a proteína p16, uma alteração genética recorrente nos cordomas. Essa alteração leva à hiperativação da via CDK4/6, tornando a U-CH1 sensível a inibidores de CDK4/6, como o palbociclib. O tratamento com palbociclib reduziu significativamente os níveis de Rb fosforilado e inibiu a proliferação in vitro, indicando que a U-CH1 pode ser um valioso modelo pré-clínico para a avaliação de terapias direcionadas ao ciclo celular. A linhagem celular também foi validada por meio de perfis de mRNA e proteínas, confirmando sua representatividade em relação aos tumores de cordoma primários no que diz respeito à expressão e aos padrões genômicos.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.