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Celle HS-695T
Tessuto
La pelle
Malattia
Melanoma amelanotico
Sito metastatico
Linfonodo
Sinonimi
Hs 695.T, Hs-695-T, Hs 695T, HS 695T, Hs695T, HS695T, Hs695

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Celle HS-695T

Cell line · Codice prodotto 300211

La linea cellulare HS-695T deriva da un melanoma umano, un tipo di tumore della pelle caratterizzato dalla trasformazione maligna dei melanociti. Queste cellule sono state...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare HS-695T deriva dal melanoma umano, un tipo di cancro della pelle caratterizzato dalla trasformazione maligna dei melanociti. Queste cellule sono state originariamente ottenute da un paziente adulto e da allora sono state ampiamente utilizzate nella ricerca sulla biologia del melanoma, sulla tumorigenesi e sulla metastasi del cancro. La linea cellulare HS-695T presenta caratteristiche chiave del melanoma, tra cui la capacità di proliferare rapidamente e di formare tumori quando viene trapiantata in topi immunocompromessi. Questa linea cellulare conserva molte delle caratteristiche molecolari e genetiche del tumore originale, il che la rende un modello prezioso per studiare i meccanismi alla base della progressione del melanoma e per testare potenziali agenti terapeutici.

Le cellule HS-695T esprimono vari marcatori associati al melanoma, tra cui Melan-A, tirosinasi e HMB-45, comunemente utilizzati per identificare e studiare i tumori melanocitici. Queste cellule sono anche note per avere mutazioni in geni come BRAF e NRAS, che sono frequentemente osservati nel melanoma e contribuiscono alle vie di segnalazione oncogeniche che guidano la crescita e la sopravvivenza del tumore. I ricercatori utilizzano la linea cellulare HS-695T per esplorare gli effetti delle terapie mirate, compresi gli inibitori di BRAF e MEK, e per studiare lo sviluppo della resistenza a questi trattamenti. Nel complesso, la linea cellulare HS-695T è uno strumento fondamentale per la ricerca sul melanoma, che contribuisce alla scoperta di nuove strategie terapeutiche e migliora la comprensione di questo tumore aggressivo.

Tessuto
La pelle
Malattia
Melanoma amelanotico
Sito metastatico
Linfonodo
Sinonimi
  • Hs 695.T
  • Hs-695-T
  • Hs 695T
  • HS 695T
  • Hs695T
  • HS695T
  • Hs695

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi immunosoppressi
Cariotipo
(P19-40) modalità = 52, cromosoma Y presente

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HS-695T (numero di catalogo Cytion 300211)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0851

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
P53 positivo
Isoenzimi
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 1, ES-D, 1, Me-2, 0, AK-1, 1, GLO-1, 1, Prodotto di frequenza del fenotipo: 0.0427
Profilo mutazionale
BRAF V600Emut

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
2 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
26 anni
Etnia
Caucasico