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Células HS-695T
Tecido
Pele
Doença
Melanoma amelanótico
Local da metástase
Nódulo linfático
Sinónimos
Hs 695.T, Hs-695-T, Hs 695T, HS 695T, Hs695T, HS695T, Hs695

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Células HS-695T

Cell line · Número do produto 300211

A linha celular HS-695T é derivada do melanoma humano, um tipo de cancro da pele caracterizado pela transformação maligna dos melanócitos. Estas células foram...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular HS-695T é derivada do melanoma humano, um tipo de cancro da pele caracterizado pela transformação maligna dos melanócitos. Estas células foram originalmente obtidas de um doente adulto e, desde então, têm sido amplamente utilizadas na investigação centrada na biologia do melanoma, na tumorigénese e na metástase do cancro. A linha celular HS-695T apresenta caraterísticas-chave do melanoma, incluindo a capacidade de proliferar rapidamente e formar tumores quando transplantada para ratinhos imunocomprometidos. Esta linha celular mantém muitas das caraterísticas moleculares e genéticas do tumor original, o que a torna um modelo valioso para estudar os mecanismos subjacentes à progressão do melanoma e para testar potenciais agentes terapêuticos.

As células HS-695T expressam vários marcadores associados ao melanoma, incluindo Melan-A, tirosinase e HMB-45, que são normalmente utilizados para identificar e estudar tumores melanocíticos. Sabe-se também que estas células têm mutações em genes como o BRAF e o NRAS, que são frequentemente observados no melanoma e contribuem para as vias de sinalização oncogénica que impulsionam o crescimento e a sobrevivência do tumor. Os investigadores utilizam a linha celular HS-695T para explorar os efeitos de terapias direcionadas, incluindo inibidores BRAF e MEK, e para investigar o desenvolvimento de resistência a estes tratamentos. Globalmente, a linha celular HS-695T é uma ferramenta essencial na investigação do melanoma, ajudando na descoberta de novas estratégias terapêuticas e melhorando a nossa compreensão deste cancro agressivo.

Tecido
Pele
Doença
Melanoma amelanótico
Local da metástase
Nódulo linfático
Sinónimos
  • Hs 695.T
  • Hs-695-T
  • Hs 695T
  • HS 695T
  • Hs695T
  • HS695T
  • Hs695

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tumorigénico
Sim, em ratinhos imunossuprimidos
Cariótipo
(P19-40) modo = 52, cromossoma Y presente

04Identificadores

Referência
HS-695T (número de catálogo Cytion 300211)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0851

05Expressão e suscetibilidade

Expressão proteica
P53 positivo
Isoenzimas
G6PD, B, PGM1, 1, PGM3, 1, ES-D, 1, Me-2, 0, AK-1, 1, GLO-1, 1, Produto de frequência fenotípica: 0.0427
Perfil mutacional
BRAF V600Emut

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
2 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Após o descongelamento, coloque as células em placas a uma densidade de 5 x 104 células/cm² e deixe-as recuperar do processo de congelamento e aderir durante pelo menos 24 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
26 anos
Etnia
Caucasiano