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T98G
Tessuto
Cervello
Malattia
Glioblastoma
Sinonimi
T 98 G, T-98G, T98 G, T98-G

Documenti

T98G

Cell line · Codice prodotto 305030

The T98G cell line is a human glioblastoma multiforme model derived from a 61-year-old male patient. It was established to study the molecular mechanisms ...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare T98G è un modello di glioblastoma multiforme umano derivato da un paziente maschio di 61 anni. È stata creata per studiare i meccanismi molecolari della tumorigenesi, della proliferazione e della trasformazione cellulare. Le cellule T98G presentano una combinazione unica di caratteristiche cellulari normali e trasformate, che le rende un modello prezioso per lo studio della biologia del cancro. In particolare, le cellule T98G sono immortali e capaci di crescita indipendente dall'ancoraggio, ma mantengono la capacità di subire un arresto di fase G1 in condizioni di fase stazionaria, una proprietà tipicamente associata alle cellule normali.

In termini di caratteristiche di crescita, le cellule T98G mostrano un'indipendenza dall'ancoraggio, come dimostrato dalla loro capacità di formare colonie in metilcellulosa, un mezzo semisolido. Tuttavia, a differenza di molte linee cellulari trasformate, si arrestano nella fase G1 del ciclo cellulare quando sono sottoposte a condizioni di alta densità cellulare o bassa concentrazione di siero. Questa capacità unica di subire l'arresto G1 in queste condizioni distingue la T98G da altre linee cellulari tumorali, come la HeLa o le cellule parentali T98, che continuano a proliferare in circostanze simili. Questo fenotipo suggerisce che le cellule T98G, pur essendo trasformate, conservano alcuni meccanismi regolatori che controllano la progressione del ciclo cellulare.

Dal punto di vista citogenetico, le cellule T98G sono altamente aneuploidi, con un numero modale di cromosomi di 124-126, che indica una significativa instabilità cromosomica. La presenza di cromosomi marcatori e cromosomi minuti nel loro cariotipo riflette ulteriormente le alterazioni genetiche comunemente associate al glioblastoma multiforme. Nonostante la loro natura trasformata e aneuploide, le cellule T98G non sono tumorigeniche quando vengono iniettate in topi nudi, dimostrando che la sola indipendenza dall'ancoraggio non è sufficiente per la tumorigenicità.

La linea cellulare T98G è uno strumento importante per studiare la progressione del glioblastoma, la regolazione del ciclo cellulare e l'interazione tra comportamenti cellulari normali e trasformati. La sua capacità di mantenere aspetti del normale arresto G1 la rende un modello particolarmente utile per esplorare i meccanismi alla base della trasformazione cellulare, i checkpoint del ciclo cellulare e i bersagli terapeutici per il glioblastoma.

Tessuto
Cervello
Malattia
Glioblastoma
Sinonimi
  • T 98 G
  • T-98G
  • T98 G
  • T98-G

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Fibroblasti
Tempo di raddoppio
40 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
T98G (numero di catalogo Cytion 305030)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0556

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo 50% di terreno basale + 40% di FBS + 10% di DMSO, o CM-1 (Cytion numero di catalogo 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crioindotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
61 anni
Etnia
Europeo